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作者：王小杉;陈雪;李新宇;范大明;崔刚;薛松;孙静;薛颖;宋伟;
单位：山东中医药大学第一临床医学院;山东第一医科大学附属省立医院肿瘤微创综合治疗科;山东省济南市中心医院病理科;
摘要：目的 利用类器官技术和细胞实验探索西黄丸联合奥希替尼对结直肠癌细胞及类器官的抗肿瘤作用。方法 通过CCK-8实验检测不同品牌及不同质量浓度(0、100、200、300、400μg/mL)西黄丸提取液对结直肠癌细胞增殖的影响和IC_(50)值，同时利用结晶紫染色进行验证。通过CCK-8实验探索西黄丸联合奥希替尼对结直肠癌细胞的杀伤力，并计算出HSA、Loewe、ZIP协同作用模型分数及最佳联合用药浓度(作为后续实验浓度)。结晶紫染色检测最佳联合浓度对细胞活性的影响；Transwell迁移、侵袭实验检测单用药和联合用药对结直肠癌细胞迁移侵袭的影响；Western blot法检测铁死亡关键调控因子(p-Nrf2、FSP1)、NF-κB、p38 MAPK、p-JNK蛋白表达。建立6例患者来源结直肠癌类器官，通过HE染色鉴定肠癌类器官与来源肿瘤组织的一致性，利用3D细胞活性试剂盒检测每例类器官用西黄丸和奥希替尼处理后的IC_(50)值以及联合用药的杀伤力。结果 不同品牌及不同质量浓度西黄丸提取液对HT29、HCT8、DLD-1肠癌细胞均有不同程度的抑制作用；协同分数(HCT8细胞中HSA、Loewe、ZIP模型协同分数分别为11.50、13.88、5.80;DLD-1细胞中HSA、Loewe、ZIP模型分数分别24.06、20.64、14.75)显示，西黄丸显著增强了奥希替尼对肠癌细胞的杀伤作用，并确定最佳联合剂量区间(奥希替尼2.5～6μmol/L、西黄丸200～300μg/mL);联合用药组的结直肠癌细胞活性降低(P<0.01),迁移侵袭能力降低(P<0.01)。在类器官水平上，联合组结直肠癌类器官的增殖活性降低。与单药比较，联合用药后联合组铁死亡关键调控因子的蛋白表达降低(P<0.01),p-JNK、p38 MAPK、NF-κB蛋白表达也降低(P<0.01)。结论 西黄丸联合奥希替尼对结直肠癌细胞和类器官均较单药有更强的抗肿瘤作用，且可能与JNK/p38 MAPK/NF-κB通路以及Nrf2、FSP1铁死亡相关蛋白有关。
关键词：西黄丸;;奥希替尼;;类器官;;结直肠癌;;铁死亡;;JNK/p38 MAPK/NF-κB信号通路
基金资助：山东省重点研发计划项目(2022CXGC020501)
