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作者：顾兰英;范文雨;李世义;张秦川;赵广新;孙延鸣;张彦兵;
单位：石河子大学动物科技学院;
摘要：前期DNA甲基化高通量测序发现妊娠母猪血液中RPL10基因启动子甲基化水平下降。本文旨在验证妊娠母猪RPL10基因启动子区域甲基化水平，进一步建立基于RPL10甲基化的猪妊娠诊断方法。选择杜洛克与长白猪的二元杂交猪作为试验对象，采集妊娠28 d和非妊娠猪的血样，下载RPL10基因启动子序列，设计甲基化特异性PCR(Methylation-specific PCR,MSP)、重亚硫酸盐测序（Bisulfite Sequencing PCR,BSP）以及荧光探针甲基化特异性PCR(qMSP)等检测引物，以RPL10基因启动子甲基化为靶标，基于荧光探针法建立猪妊娠检测方法并初步应用。结果发现，相比于空怀母猪，母猪妊娠25 d母猪血液中RPL10基因启动子区域甲基化水平显著下降；以β-actin为内参探针，成功设计RPL10甲基化探针，成功建立qMSP检测方法并初步应用。基于RPL10甲基化探针检测技术与B超检测符合率进行分析，ROC(Receiver Operating Characteristic)曲线AUC(Area Under roc Curve)值为0.896 8,qMSP检测技术符合率为87.5%。本研究首次证实母猪妊娠早期RPL10基因启动子水平显著下降，基于RPL10甲基化荧光探针检测技术可作为一种早期诊断猪妊娠的补充方法。
关键词：DNA甲基化;;妊娠诊断;;荧光探针;;核糖体蛋白L10
基金资助：动物生物医药兵团重点实验室开放性课题（FMOF2023002）;; 兵团指导性科技计划项目（2023ZD042）;; 新疆维吾尔自治区青年科学基金项目（2022D01B197）
