来源：期刊VIP网 时间：
作者：吴清;韩泉;张晋;
单位：湖北省荣军医院老年医学科;武汉市红十字会医院全科;
摘要：目的 分析心力衰竭合并肺部感染铜绿假单胞菌外膜蛋白(Opr)F的生物学功能及其原核表达。方法 由NCBI数据库获取OprF蛋白的基因组信息，分析OprF蛋白理化性质、跨膜结构、信号肽、二级与三级结构等生物学信息。提取心力衰竭合并肺部感染的铜绿假单胞菌基因组DNA,扩增OprF羧基端，构建重组表达载体pET28b-F。采用杂交瘤技术制备单克隆抗体，采用Western印迹法进行鉴定。结果 OprF基因编码蛋白分子量为37.64 kD,脂溶性指数为69.44,等电点为4.98,有多个酶切位点，OprF为亲水性蛋白。信号肽为1～24位氨基酸，OprF蛋白无跨膜结构。二级结构中α-螺旋氨基酸比例为30.45%,β-转角为10.58%,β-片层为26.75%,无规则卷曲为32.22%。OprF蛋白的三维空间结构为桶状结构。OprF蛋白B细胞优势表位区段：73～88、98～107及302～317。细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位为250～258位的SKVKENSYA及236～331位的PVADNATAE,OprF蛋白的优势Th抗原表位为46～54位的VRNMKNADL,53～59位的YGGSIGY,109～117位的LRPYVSAGL及303～312位的LVNEYGVEG。pET28b-F原核表达载体构建成功，诱导后表达外膜蛋白OprF。结论 系统分析了心力衰竭合并肺部感染铜绿假单胞菌OprF蛋白的理化性质、跨膜结构、信号肽、二级与三级结构等生物学信息，同时成功筛选出特异性抗OprF单克隆抗体。
关键词：心力衰竭合并肺部感染;;铜绿假单胞菌;;外膜蛋白F;;生物学功能;;原核表达;;抗原表位
