来源：期刊VIP网 时间：
作者：何玉兰;于艳辉;
单位：赤峰学院附属医院神经内科;
摘要：目的 探索芒柄花素通过调节血管内皮生长因子(VEGF)/轴突导向蛋白(Sema)4D/神经丛蛋白(Plexin)B1通路对缺血性脑卒中大鼠梗死体积和血管再生的影响及其作用机制。方法 首先构建大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型，并分为对照组、模型组、芒柄花素10、30、50 mg/kg组、丁基苯酞组及VEGF抑制剂组、VEGF抑制剂+芒柄花素组。利用~(18)F-脱氧葡萄糖(FDG)micro-PET影像系统检测脑再灌注后血流情况，2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法评估大鼠脑梗死体积。采用双免疫荧光染色法明确缺血边界内皮细胞和外周细胞共定位血管区域，在对侧和同侧区域的内皮标记血管性假血友病因子(vWF),并对毛细血管进行二氨基联苯胺(DAB)染色，检测vWF共标记的半影区VEGF的染色情况。Western印迹检测VEGF、PlexinB1和Sema4D蛋白表达。最后再利用大鼠血管内皮细胞(RAOEC)构建体外细胞模型，分为对照组、VEGF过表达组、VEGF抑制剂组。结果 相较于模型组，不同剂量下芒柄花素组和丁基苯酞组脑组织缺血改善程度明显，其中芒柄花素50 mg/kg组的效果最好，后续命名为芒柄花素组。术后7 d,芒柄花素组~(18)F-PDG摄取显著高于模型组(P<0.05)。术后3、7 d,与模型组相比，芒柄花素给药显著减少大鼠的脑梗死体积(P<0.05)。MCAO大鼠术后7 d检测到与vWF共标记的半影区VEGF的强染色。免疫荧光实验显示，缺血诱导了大鼠脑部半暗区血管生成，而血管密度在7 d时呈现高峰期，相较于对照组，模型组和芒柄花素组在术后7 d明显具有血管生成密度(P<0.05)。相较于对照组和模型组，芒柄花素组CD31和Brdu活性明显增加(P<0.05)。术后3、7 d,相较于对照组，模型组中Sema4D、PlexinB1和VEGF表达明显提高(P<0.05);与模型组相比，芒柄花素组Sema4D、PlexinB1和VEGF表达显著降低(P<0.05),VEGF抑制剂组Sema4D、PlexinB1和VEGF表达明显降低(P<0.05),VEGF抑制剂组和芒柄花素组差异不明显(P>0.05),而VEGF抑制剂+芒柄花素组中Sema4D、PlexinB1和VEGF蛋白表达明显低于芒柄花素组(P<0.05)。体外细胞实验结果显示，与对照组相比，VEGF过表达组中Sema4D、PlexinB1、VEGF均显著降低，VEGF抑制剂组中Sema4D、PlexinB1、VEGF显著升高(P<0.05)。结论 芒柄花素可通过调节VEGF的表达影响Sema4D/PlexinB1信号轴从而改善缺血性脑卒中大鼠的梗死体积和血管再生。
关键词：芒柄花素;;血管内皮生长因子(VEGF);;轴突导向蛋白(Sema)4D/神经丛蛋白(Plexin)B1;;缺血性脑卒中
基金资助：内蒙古人类遗传病研究重点实验室开放课题(YC202105)
