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作者：焦策;高丽萍;杨敬芳;
单位：河北医科大学第二医院;
摘要：目的 探究miR-199a通过调控缺氧诱导因子(HIF)-1α/血管内皮细胞生长因子(VEGF)信号通路对人宫颈癌SiHa细胞恶性逆转作用及辅助性T细胞(Th)1/Th2水平的影响。方法 实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测正常宫颈上皮细胞及人宫颈癌SiHa细胞中miR-199a表达水平，取SiHa细胞将其分为SiHa细胞(SH)组、SiHa细胞+miR-199a-NC(MN)组、SiHa细胞+miR-199a抑制剂(MI)组、SiHa细胞+miR-199a激动剂(MM)组、SiHa细胞+HIF-1α-NC(HN)组、SiHa细胞+HIF-1α激动剂(HM)组、SiHa细胞+HIF-1α抑制剂(HI)组、SiHa细胞+miR-199a激动剂+HIF-1α抑制剂(MH)组，噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖，小室法检测细胞侵袭，酶联免疫吸附试验检测Th1/Th2因子水平，Western印迹法检测HIF-1α/VEGF信号通路相关蛋白表达，双荧光素酶报告实验证实miR-199a和HIF-1α/VEGF信号通路的相互作用。结果 与HUCEC相比，SiHa细胞系中的miR-199a mRNA表达量显著降低(P<0.05);与MN组相比，MI组增殖率、侵袭数量、HIF-1α、VEGF蛋白表达、白细胞介素(IL)-4、IL-10含量明显升高，干扰素(IFN)-γ、IL-2含量明显降低(P<0.05);与MI、MN组相比，MM组增殖率、侵袭数量、HIF-1α、VEGF蛋白表达、IL-4、IL-10含量明显降低，IFN-γ、IL-2含量明显升高(P<0.05);与HN组相比，HM组增殖率、侵袭数量、HIF-1α、VEGF蛋白表达、IL-4、IL-10含量明显升高，IFN-γ、IL-2含量明显降低(P<0.05);与HM组相比，HI组增殖率、侵袭数量、HIF-1α、VEGF蛋白表达、IL-4、IL-10含量明显降低，IFN-γ、IL-2含量明显升高(P<0.05);与HI组相比，MH组增殖率、侵袭数量、HIF-1α/VEGF蛋白表达、IL-4、IL-10含量明显降低，IFN-γ、IL-2含量明显升高(P<0.05);双荧光素酶报告结果显示，转染miR-199a后可显著降低HIF-1α-3′-UTR-WT荧光素酶活性(P<0.05),但对突变基因无显著影响(P>0.05)。结论 过表达miR-199a可有效改善宫颈癌细胞恶性逆转作用，并有效调控Th1/Th2水平，其作用机制可能与抑制HIF-1α/VEGF信号通路有关。
关键词：miR-199a;;缺氧诱导因子(HIF)-1α/血管内皮细胞生长因子(VEGF)信号通路;;宫颈癌;;恶性逆转作用;;辅助性T细胞(Th)1/Th2
基金资助：河北省医学科学研究课题计划项目(20200939)
