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作者：卢贞;王耀华;徐钧峰;
单位：河北大学附属医院药学部;清华大学玉泉医院(清华大学中西医结合医院)药剂科;河北荣军医院器械科;
摘要：目的 探讨血必净通过激活核因子E2相关因子(Nrf)2/血红素加氧酶(HO)-1通路抑制核因子(NF)-κB-核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(NLRP)3信号轴减轻急性肺损伤。方法 成年雄性BALB/c小鼠50只分为模型组[脂多糖(LPS)诱导剂量为5 mg/kg],血必净低、高浓度组(每天分别给予10、20 mg/kg血必净1次),地塞米松组(每天给予地塞米松10 mg/kg 1次，持续3 d,最后1次给药2 h后给予LPS处理)及对照组(给予适当生理盐水，不做LPS处理)各10只。用肺上皮BEAS-2B细胞制作体外细胞模型，实验分为5组：空白组(不做处理)、模型组(给予LPS 200 ng/ml处理细胞12 h)、血必净高、低浓度组(分别给予血必净10、20 mg/ml培养12 h后，再给予LPS 200 ng/ml处理细胞12 h)、Nrf2过表达组和siNrf2组[分别转染1μl构建的Nrf2过表达载体和靶向Nrf2的siRNA(siNrf2)处理细胞12 h后，再给予LPS 200 ng/ml处理细胞12 h]。苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理学变化，化学荧光法检测活性氧(ROS),硫代巴比受酸法(TBA)法检测丙二醛(MDA),水溶性四唑盐(WST)-1法检测超氧化物歧化酶(SOD)水平。Western印迹检测各因子蛋白表达。免疫荧光检测Nrf2对NF-κB的影响，TUNEL染色检测细胞凋亡。结果 与对照组比较，模型组白细胞、中性粒细胞、NLRP3、白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、NF-κB、ROS表达和MDA水平显著升高，Nrf2、HO-1蛋白表达和SOD水平显著降低(P<0.05)。与模型组比较，血必净高、低浓度组白细胞、中性粒细胞、NLRP3、IL-1β、TNF-α、NF-κB、ROS表达和MDA水平显著降低，Nrf2、HO-1蛋白表达和SOD水平显著升高(P<0.05)。以上指标血必净高浓度组较低浓度组变化更显著(P<0.05),血必净高浓度组与地塞米松组无显著差异(P>0.05)。抑制Nrf2可明显激活NF-κB、NLRP3、IL-1β、TNF-α和胱天蛋白酶(Caspase)1蛋白表达，Nrf2过表达可明显抑制NF-κB、NLRP3、IL-1β、TNF-α、和Caspase1蛋白表达(P<0.05)。与血必净组比较，使用Nrf2抑制剂(ML385)后ROS相对表达、ROS、MDA水平及NLRP3、NF-κB蛋白表达、细胞凋亡能力显著升高，SOD水平及Nrf2、HO-1蛋白表达明显降低(P<0.05)。而使用Nrf2激动剂萝卜硫素(Sulforaphane)后ROS相对表达、ROS、MDA水平及NLRP3、NF-κB蛋白表达、细胞凋亡能力显著升降低，SOD水平及Nrf2、HO-1蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论 血必净可能是Nrf2的有效激活剂，血必净可通过激活Nrf2/HO-1通路抑制NF-κB-NLRP3信号轴减轻急性肺损伤的氧化应急损伤和炎症表达，这可能是血必净减轻急性肺损伤炎症反应的机制。
关键词：血必净;;核因子E2相关因子(Nrf)2/血红素加氧酶(HO)-1;;核因子(NF)-κB-NLR核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(NLRP)3;;急性肺损伤
基金资助：河北省中医药管理局课题项目(2022416)
