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作者：吕曼婷;吴科惠;王励阳;孙宁;张亚南;王攀林;李向臣;宋丹;
单位：浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室;南京农业大学动物科技学院;
摘要：草甘膦（Glyphosate,GLY）是世界上使用广泛的除草剂之一，对各种生物体都能产生毒性作用，但其对牛子宫内膜细胞凋亡和自噬的影响尚不清楚。本研究使用牛子宫内膜上皮细胞系，采用CCK8和乳酸脱氢酶（LDH）法评估不同浓度GLY(0、1、2.5、5、10、20 mmol/L)对细胞的毒性作用；采用Hoechst33258染色检测细胞凋亡；酶联免疫吸附试验检测抗氧化酶活性；采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹检测凋亡和自噬相关基因mRNA和蛋白表达水平。结果表明：随着GLY浓度增加，细胞活力以浓度依赖方式降低，细胞上清液中LDH活性显著提高；Hoechst33258荧光染色结果显示，与未处理组相比，5、10 mmol/L GLY暴露的细胞中蓝色荧光强度显著增强，且出现明显的细胞核皱缩；与未处理组相比，5、10 mmol/L GLY处理显著增加促凋亡基因Caspase3和Bax mRNA相对表达量和蛋白表达，显著降低抑凋亡基因Bcl-2 mRNA相对表达量和蛋白表达；GLY暴露的细胞中超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶抗氧化酶活性显著降低；此外，5 mmol/L GLY暴露显著增加LC3-II和p62蛋白水平。本研究发现GLY能够降低细胞活力，促进细胞凋亡，抑制细胞自噬。
关键词：草甘膦;;牛子宫内膜上皮细胞;;自噬;;凋亡
基金资助：国家自然科学基金青年科学基金项目（32202752）;; 浙江省自然科学基金（LQ22C170001）;; 浙江农林大学国家级大学生创新创业训练计划项目（202310341029）;浙江农林大学科研发展基金（2020FR080）
