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作者：刘丽波;李洋;杨子豪;王德国;王松;李春;
单位：东北农业大学食品学院;许昌学院;黑龙江省绿色食品科学研究院;
摘要：将梯型熔解温度核酸等温扩增技术（Ladder-shape melting temperature nucleic acid isothermal amplification,LMTIA）与校对酶介导探针（Proofreading enzyme-mediated probe cleavage,Proofman）联合，建立动物双歧杆菌乳亚种快速分型检测方法。首先针对动物双歧杆菌乳亚种（Bifidobacterium animalis subsp. lactis,B.Lactis）全基因组中的“梯形”熔解曲线进行特异性检查，再设计引物并合成Proofman探针，优化等温扩增温度后，使用其他双歧杆菌验证方法的特异性，再通过实时荧光定量PCR(Real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)方法进行灵敏度、扩增效率对比及真实样品检测验证。结果表明，利用Proofman-LMTIA建立的B.Lactis快速分型检测方法的引物最适温度为63℃，灵敏度为1 pg/μL，并具有良好稳定性。同其他5种双歧杆菌基因组DNA无交叉反应，且能在20 min内完成检测，比qPCR方法灵敏度高10倍，比qPCR方法扩增效率高3倍，真实样品检测结果与qPCR法一致。建立的扩增方法不需要变温条件即可快速扩增，兼具灵敏、准确等优点，适合大部分场景下动物双歧杆菌乳亚种的快速分型鉴定。
关键词：动物双歧杆菌乳亚种;;Proofman探针;;梯型熔解温度核酸等温扩增;;快速检测
基金资助：国家自然科学青年基金（No.31801518）;; 黑龙江省省级本科高等学校优秀青年教师（YQJH2023180）;; 黑龙江省自然科学基金重点项目（ZD2022C007）
