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作者：庞博;高雅;姜大成;孙云龙;
单位：济宁医学院药学院;长春中医药大学高士贤全国名老中医药专家传承工作室;
摘要：目的 运用血清代谢组学、网络药理学及分子对接技术，探究哈蟆油抗衰老的作用机制。方法 采用皮下注射D-半乳糖[800 mg/(kg·d)]方法建立衰老小鼠模型，给予哈蟆油[400 mg/(kg·d)]干预治疗，观察小鼠体态并检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)变化。采用液相-质谱联用技术(LC-MS)检测各组血清中的差异代谢物，并分析差异代谢通路。此外，采用网络药理学技术构建哈蟆油抗衰老的成分-靶点-疾病”网络，并利用分子对接方法验证潜在活性成分与核心靶点的相互作用。结果 哈蟆油可明显改善模型小鼠SOD、GSH-Px水平降低及MDA升高的氧化应激表现(P<0.01,P<0.001);在各组血清中共筛选出差异代谢物36种，这些代谢物主要影响牛磺酸与亚牛磺酸代谢、维生素B6代谢、酮体的合成与降解等；网络药理学结果表明，哈蟆油抗衰老关键成分分别是花生四烯酸甲酯(Methyl arachidonate)、棕榈酸胆固醇酯(Cholesteryl palmitate)、菜油甾醇(Campesterol)、睾酮(Testosterone)、11,14-二十碳二烯酸(11,14-Eicosadienoic acid),核心靶点为TP53、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)3、酪氨酸蛋白激酶(SRC)、MAPK1、热休克蛋白90 kD-A(HSP90AA)1。通过分子对接实验验证关键成分与核心靶点之间结合能均小于-5.0 kcal/mol,京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集结果表明，主要涉及Ras相关蛋白(Rap)1、Ras、MAPK、磷脂酰激醇-3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)信号通路等。结论 哈蟆油抗衰老具有多成分、多靶点、多通路协同作用的特点，为深入阐明哈蟆油抗衰老的作用机制提供理论参考。
关键词：哈蟆油;;抗衰老;;代谢组学;;网络药理学
基金资助：吉林省发改委产业技术研究与开发项目(No.2020C037-3);; 吉林省科技发展计划项目(No.20150309007YY)
