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作者：刘涛;郝清海;
单位：滕州市中心人民医院脊柱外科;
摘要：目的 探究小檗碱调节PTEN诱导假定激酶(PINK)1/Parkin信号通路对人椎间盘退变(IDD)髓核细胞(NPCs)自噬和凋亡的影响。方法 体外培养人NPCs并以10 ng/ml白细胞介素(IL)-1β诱导建立IDD细胞模型，采用CCK-8法测定0.0、2.5、5.0、10.0、20.0、30.0μmol/L小檗碱处理的IL-1β诱导前后的人NPCs细胞活力，选出最佳小檗碱作用浓度。将体外培养的人NPCs随机分为对照组、模型组、小檗碱(20μmol/L)组、阴性对照(转染PINK1 siRNA阴性对照)组、小檗碱(20μmol/L)+PINK1敲低(转染PINK1 siRNA)组，除对照组外，其余各组采用10 ng/ml IL-1β诱导建立IDD模型的同时以小檗碱、PINK1 siRNA和其阴性对照分组处理后采用CCK-8法、流式细胞术分别检测各组细胞增殖与凋亡；采用JC-1荧光染色检测各组人NPCs线粒体膜电位；采用流式细胞术检测各组人NPCs自噬率；采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞炎症因子IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-8水平；采用B细胞淋巴瘤印迹检测各组细胞自噬相关蛋白[微管相关蛋白1A/1B-轻链(LC)3Ⅱ/LC3Ⅰ、螺旋肌球蛋白样B细胞淋巴瘤(BCL)2相互作用蛋白(Beclin)-1]与PINK1/Parkin通路相关蛋白表达。结果 与对照组相比，模型组人NPCs细胞活力、线粒体膜电位、自噬率、Beclin-1与PINK1、Parkin蛋白表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ显著降低，凋亡率、IL-6与TNF-α、IL-8水平显著升高(P<0.05)。与模型组相比，小檗碱组人NPCs细胞活力、线粒体膜电位、自噬率、Beclin-1与PINK1、Parkin蛋白表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ明显升高，凋亡率、IL-6与TNF-α、IL-8水平明显降低(P<0.05);阴性对照组人NPCs细胞各指标无明显变化(P>0.05)。与小檗碱组相比，小檗碱+PINK1敲低组人NPCs细胞活力、线粒体膜电位、自噬率、Beclin-1与PINK1、Parkin蛋白表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ明显降低，凋亡率、IL-6与TNF-α、IL-8水平明显升高(P<0.05)。结论 小檗碱可上调PINK1/Parkin信号通路蛋白表达，进而抑制IL-1β诱导的人IDD NPCs炎症，促进其线粒体自噬，从而提升其细胞活力并抑制其凋亡。
关键词：小檗碱;;PTEN诱导假定激酶(PINK)1/Parkin;;椎间盘退变;;髓核细胞;;自噬;;凋亡
基金资助：2023年度山东省医务职工科技创新计划联合立项项目(SDYWZGKCJHLH2023056);; 徐州医科大学附属医院发展基金资助项目(XYFY202217)
