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作者：左瑞庭;刘汝银;王西彬;
单位：河南中医药大学第二附属医院风湿科;河南中医药大学第二附属医院脊柱科;
摘要：目的 探究雷公藤多苷(TG)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成软骨分化的影响及其作用机制。方法 分离SD大鼠股骨BMSCs,采用流式细胞术鉴定。取第3代细胞，使用成软骨分化诱导培养基培养BMSCs,第12小时加入不同浓度的TG(10、20、40、80 mg/L),培养14 d后，噻唑蓝(MTT)法检测BMSCs增殖活性，Western印迹检测成软骨分化标志蛋白Ⅱ型胶原蛋白(CollagenⅡ)和SRY盒转录因子(Sox)-9及Hedgehog通路相关蛋白平滑同源物(Smo)、补丁同源物(Ptch)1、GLI家族锌指蛋白(Gli)1和Gli2蛋白表达水平，采用阿利新蓝染色法检测成软骨分化。采用Hedgehog通路抑制剂HPI-4作用于80 mg/L TG处理的BMSCs,上述方法检测BMSCs成软骨分化及增殖活性。结果 分离得到的BMSCs均呈CD29、CD44阳性表达，CD34、CD45均呈现阴性表达，表明成功分离BMSCs。在成软骨分化过程中，与对照组相比，TG 20、40、80 mg/L组BMSCs增殖活性、成软骨分化标志蛋白CollagenⅡ(除TG 20 mg/L组)和Sox-9蛋白表达均明显升高(P<0.05)。与对照组相比，Hedgehog通路相关蛋白Smo、Ptch1、Gli1和Gli2蛋白表达水平随着TG浓度上升而呈现不同程度升高，到80 mg/L时，上述指标均明显升高(P<0.05)。Hedgehog通路抑制剂HPI-4作用之后，TG对BMSCs成软骨分化的促进作用被显著抑制(P<0.05)。结论 TG通过激活Hedgehog通路促进BMSCs成软骨分化。
关键词：雷公藤多苷;;骨髓间充质干细胞;;成软骨分化;;Hedgehog通路
基金资助：河南省中医药科学研究专项课题(No.2019ZYBJ18)
