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作者：李鸷;吴迪;田飞;刘洁;谢兴明;
单位：遵义市第一人民医院胃肠外科;
摘要：目的 探究DNA甲基转移酶(DNMT)1介导的VHL基因DNA甲基化在直肠癌(READ)中的作用。方法 基因表达谱交互式分析(GEPIA)数据库分析READ组织中DNMT1、VHL表达水平及其与患者预后的关系。甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)、Western印迹检测READ组织和细胞系中VHL DNA甲基化水平、DNMT1、VHL mRNA和蛋白表达。Caco-2细胞分为过表达对照(NC)组、过表达DNMT1(DNMT1)组、敲低对照(sh-NC)组、敲低DNMT1表达(sh-DNMT1)组、过表达对照+5-氮杂脱氧胞苷(NC+5-Aza-CdR)组、过表达DNMT1+5-Aza-CdR(DNMT1+5-Aza-CdR)组。MSP、RT-qPCR、Western印迹检测Caco-2细胞中VHL DNA甲基化水平、DNMT1、VHL mRNA和蛋白表达。细胞计数试剂盒(CCK)-8实验检测细胞增殖能力。30只裸鼠随机分为sh-NC组和sh-DNMT1组。构建裸鼠移植瘤模型，4 w后测定移植瘤各项指标差异。结果 GEPIA数据库显示，READ组织中DNMT1表达水平明显升高，VHL表达水平明显降低，二者均与患者不良预后有关(P<0.05)。与正常结肠组织和细胞相比，READ组织和细胞系中VHL DNA甲基化水平、DNMT1 mRNA和蛋白表达明显升高，VHL mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05)。与NC组相比，DNMT1组细胞VHL DNA甲基化水平、DNMT1 mRNA和蛋白表达、72 h光密度(OD)值明显升高，VHL mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05);与sh-NC组相比，sh-DNMT1组细胞VHL DNA甲基化水平、DNMT1 mRNA和蛋白表达明显降低，VHL mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05);与NC+5-Aza-CdR组相比，DNMT1+5-Aza-CdR组细胞VHL DNA甲基化水平、DNMT1 mRNA和蛋白表达、72 h OD值明显升高，VHL mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05)。与sh-NC组相比，sh-DNMT1组裸鼠移植瘤体积减小，瘤质量减轻，瘤组织VHL DNA甲基化水平、DNMT1 mRNA和蛋白表达降低，VHL mRNA和蛋白表达升高，差异显著(P<0.05)。结论 DNMT1能够介导VHL基因DNA甲基化，在READ中发挥促癌作用。
关键词：DNA甲基转移酶(DNMT)1;;DNA甲基化;;直肠癌;;VHL基因
基金资助：遵义市科技计划课题(遵市科合HZ字(2019)159号,遵市科合HZ字(2023)46号)
