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作者：武坤;黄佳莉;程沈菊;李艳红;曾云;史明霞;
单位：云南省检验医学重点实验室;云南省医学检验临床医学研究中心;昆明医科大学第一附属医院医学检验科;昆明医科大学第一附属医院血液科;云南省血液病研究中心;
摘要：目的：探讨敲除DNA甲基转移酶1(DNMT1)对NK细胞抑制急性髓系白血病（AML）的影响及机制。方法：收集AML患者、对照人群外周血NK细胞，PCR测定DNMT1 mRNA水平，Western blot测定DNMT1蛋白水平。构建DNMT1敲除小鼠，获取NKDNMT1-/-细胞；以白介素-12、15、18刺激NK细胞以构建记忆性NK细胞，ELISA法测定γ干扰素（IFN-γ）水平。将记忆性NK细胞与HL60细胞共培养，LDH法检测NKDNMT1-/-细胞对HL60细胞的杀伤作用，流式细胞术检测HL60细胞凋亡及NK细胞NKG2D水平，Western blot测定NK细胞穿孔素、颗粒酶B蛋白水平。通过尾静脉注射HL60细胞构建AML模型小鼠，同时注射记忆性NK细胞，检测小鼠体重、CD33阳性率及生存时间。结果：AML患者外周血NK细胞DNMT1 mRNA、蛋白水平均明显高于对照组（均P<0.01），经白介素刺激后IFN-γ水平明显低于对照组（P<0.05）。与NKDNMT1+/+细胞比较，NKDNMT1-/-细胞经白介素刺激后IFN-γ分泌能力明显升高（P<0.05）。NKDNMT1-/-细胞对HL60细胞杀伤、凋亡诱导作用明显强于NKDNMT1+/+细胞（均P<0.05）。NKDNMT1-/-细胞的NKG2D水平及表达穿孔素、颗粒酶B能力明显高于NKDNMT1+/+细胞（均P<0.05）。与注射NKDNMT1+/+细胞的AML小鼠相比较，注射NKDNMT1-/-细胞的AML小鼠体重明显增加，CD33阳性率明显下降，生存时间明显延长（均P<0.05）。结论：敲除DNMT1可增强NK细胞对AML的抑制作用，其机制可能与增强NK细胞记忆功能相关。
关键词：DNA甲基转移酶1;;急性髓系白血病;;NK细胞;;记忆性
基金资助：云南省科技厅科技计划项目,基础研究计划（202201AY070001-058）;; 云南省"高层次人才培养支持计划"名医专项基金资助项目（RLMY20200020）
