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作者：许庆林;刘彦权;张和荟;王芬;李祚涛;严志民;陈淑娟;朱宏泉;
单位：赣南医科大学第一附属医院重症医学科;南方医科大学南方医院赣州医院(赣州市人民医院)血液内科,江西省卫健委白血病重点实验室;赣南医科大学第一附属医院血液内科;赣南医科大学第一附属医院肾内科血透室;
摘要：目的：探讨羟氯喹（HCQ）对急性髓系白血病（AML）化疗后重症感染免疫介质失调的影响及其相关调控作用的分子机制。方法：收集2022年8月-2023年6月赣南医科大学第一附属医院36例化疗后重症感染AML(AMLSI)患者以及29例化疗后未感染AML(AML-NI)患者的骨髓或外周血标本，另选取本院同时期21名健康者外周血为对照组，采用RT-qP CR技术检测CXCL12、CXCR4、CXCR7 mRNA的表达情况，ELISA检测IL-6、IL-8、TNF-α水平，选取并构建白血病源性THP-1细胞为AML疾病模型，并将AML-SI患者骨髓间充质干细胞与THP-1细胞共培养，分为单独培养（Mono）组和共培养（Co-culture）组，给予不同浓度梯度HCQ干预THP-1细胞，后续采用CCK-8法检测细胞增殖活性，Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡，ELISA检测细胞共培养体系上清液中IL-6、IL-8、TNF-α水平变化差异，RT-qP CR技术检测CXCL12-CXCR4/7调控轴核心成员mRNA表达改变，Western blot技术检测凋亡调控分子及相关信号通路蛋白的表达情况。结果：AML患者CXCL12、CXCR4、CXCR7及IL-6、IL-8、TNF-α均异常升高，而AML-SI患者升高更为显著（均P<0.01），且AML-NI患者与AML-SI患者两组之间差异有统计学意义（均P<0.05）。给予HCQ干预THP-1细胞后，可抑制白血病细胞增殖并诱导其凋亡，但低浓度HCQ对白血病细胞杀伤作用不显著。将THP-1细胞与AML患者骨髓间充质干细胞共培养时，Co-culture组上清液中IL-6、IL-8及TNF-α水平较Mono组显著升高（均P<0.01）。当给予HCQ干预后，Mono组细胞培养上清液中IL-6、IL-8和TNF-α水平较其干预前显著降低（均P<0.01）,Co-culture组亦显著降低（均P<0.001），但HCQ对CXCL12-CXCR4/7调控轴核心成员表达影响微弱。HCQ干预THP-1细胞后，可上调促凋亡蛋白Bax表达、下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达并在促使Caspase-3水解活化的同时抑制TLR4/NF-κB通路的活化水平，继而诱发THP-1细胞程序性死亡。结论：CXCL12-CXCR4/7轴核心成员及相关细胞因子可能是AML患者重症感染免疫紊乱的重要介质，HCQ可抑制细胞因子水平以逆转免疫介质失调，并遏制白血病细胞恶性生物学特性，其机制很可能与调控Bcl-2家族蛋白表达、水解活化Caspase-3以及抑制TLR4/NF-κB信号通路激活等有关。
关键词：羟氯喹;;急性髓系白血病;;重症感染;;免疫失衡;;程序性死亡;;分子机制
基金资助：江西省赣州市科技计划重点研发计划项目（2022XM038904）;; 江西省卫健委科技计划项目（20155442）;; 江西省科技厅科技计划项目（20133BBG70093）
