来源：期刊VIP网 时间：
作者：张婷;王翠翠;朱聪;周欣宇;贾秀红;
单位：滨州医学院附属医院儿科;
摘要：目的:研究荜茇酰胺(piperlongumine, PL)对人耐阿霉素(adriamycin, ADR)慢性髓系白血病细胞K562/ADR增殖及铁死亡的影响，并探究其可能的分子作用机制。方法:CCK-8法检测PL对K562/ADR细胞存活率的影响，筛选合适药物浓度。低、中、高浓度PL(2、4、6μmol/L)处理K562/ADR细胞后，EdU增殖实验和平板克隆形成实验检测细胞增殖情况及克隆形成能力；CCK-8法检测不同抑制剂(铁死亡抑制剂Fer-1、凋亡抑制剂Z-VAD、坏死性凋亡抑制剂Nec-1)与PL联用后对细胞增殖能力的影响；铁离子比色法、DCFH-DA荧光探针法、MDA和GSH试剂盒分别检测细胞内Fe~(2+)、ROS、MDA和GSH含量；RT-qPCR和Western blot检测细胞内GPX4基因和蛋白的表达水平。生物信息学网站预测可靶向调控GPX4的miRNA;RT-qPCR检测低、中、高浓度PL对已预测miRNA表达水平的影响；双荧光素酶基因报告实验验证GPX4和miR-214-3p靶向关系。单用PL或PL+miR-214-3p inhibitor处理细胞后，检测细胞内Fe~(2+)、ROS、MDA、GSH含量和GPX4蛋白的表达水平。结果:PL呈浓度依赖性抑制K562/ADR细胞增殖(r=0.979)。与空白对照组相比，低、中、高浓度PL组细胞的EdU细胞阳性率和克隆形成能力均明显下降(P<0.01)。与单用不同浓度PL组比较，PL联用Z-VAD组细胞存活率轻度增加(P<0.05);与中、高浓度PL单用组比较，PL+Fer-1联用组的细胞存活率均显著增加(P<0.01)。与空白对照组相比，低浓度PL组细胞内ROS表达水平轻度增高(P<0.05),GSH含量轻度降低(P<0.05),中、高浓度PL组细胞内Fe~(2+)、ROS、MDA含量均明显升高(P<0.01),GSH含量、GPX4 mRNA和蛋白表达水平均显著下降(P<0.01)。生物信息学预测及双荧光素酶报告基因实验验证GPX4和miR-214-3p具有靶向关系。与空白对照组相比，中、高浓度PL组细胞内miR-214-3p表达水平均明显升高(P<0.01)。与单用PL组比较，PL+miR-214-3p inhibitor组细胞内Fe~(2+)、 ROS和MDA含量均降低(P<0.01),GSH含量和GPX4蛋白的表达水平均显著升高(P<0.01)。结论:中、高浓度PL可通过诱导K562/ADR细胞铁死亡抑制其增殖，其作用机制与调控miR-214-3p/GPX4通路有关。
关键词：荜茇酰胺;;miR-214-3p;;GPX4;;铁死亡;;白血病
基金资助：山东省自然科学基金(ZR2020LZL020);山东省自然科学基金(ZR2014HL032);; 山东省医药卫生科技发展计划项目(2017WS038)
