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作者：刘凯帆;曾令基;耿素霞;黄欣;李敏明;赖沛龙;翁建宇;杜欣;
单位：华南理工大学医学院;南方医科大学附属广东省人民医院(广东省医学科学院)血液科;
摘要：目的:构建BCL-2抑制剂维奈克拉耐药的急性髓系白血病(AML)细胞株，检测维奈克拉耐药细胞株对BCL-2家族蛋白的敏感性，并探讨其耐药的机制。方法:利用CCK-8法筛选对维奈克拉相对敏感的急性髓系白血病细胞株(MV4-11、MOLM13、OCI-AML2),低浓度维奈克拉持续诱导细胞株产生耐药，CCK-8法、流式细胞术分别检测耐药前后的细胞活力、凋亡率，BH3分析法分析耐药细胞株线粒体凋亡通路中促凋亡蛋白的失衡以及对药物敏感性的变化，并用实时荧光定量PCR检测耐药细胞系以及多药耐药患者BCL-2家族蛋白表达水平的改变。结果:成功构建了MV4-11、MOLM13、OCI-AML2的维奈克拉耐药细胞株，IC_(50)均达到10倍以上，在相同浓度的维奈克拉作用下，耐药细胞凋亡率明显下降(P<0.05);BH3分析显示，耐药细胞株对促凋亡蛋白(如BIM、BID和NOXA)敏感性增加；实时荧光定量PCR检测结果显示，耐药细胞株中MCL1表达上调，NOXA1表达下调。维奈克拉耐药患者MCL1、NOXA1表达变化与本研究所建立的耐药细胞系结果一致。结论:本研究通过低浓度持续诱导法成功构建了维奈克拉耐药的AML细胞株，维奈克拉耐药导致了细胞线粒体凋亡通路的改变以及对促凋亡蛋白BIM、BID和NOXA的敏感性上升，这可能与耐药细胞中MCL1表达上调、NOXA1表达下调有关。
关键词：急性髓系白血病;;维奈克拉;;BCL-2家族;;耐药;;抗凋亡蛋白
基金资助：登峰计划河源帮扶专项资金(DFJHBF202107);; 国家自然科学基金(82070128);; 广东省基础与应用基础研究基金项目(2021A1515011436)
