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作者：王晨晨;王亚丽;蔡媛华;郑巧云;林振兴;陈英玉;
单位：福建医科大学附属协和医院血液科,福建省血液病研究所,福建省血液病学重点实验室;福建医科大学医学技术与工程学院;
摘要：目的:RNA转录组测序分析血友病A (HA)小鼠脾细胞抗凝血因子Ⅷ(FⅧ)免疫反应相关分子水平改变，揭示FⅧ抑制物生成相关分子机制。方法:通过重组人源FⅧ免疫重型HA小鼠，构建FⅧ抑制物模型鼠。采用高通量RNA转录组测序(Bulk RNA-seq)经CASAVA碱基识别获得高质量原始数据，完成两组差异表达基因(DEGs)分析。对DEGs进行GO注释分类统计，获得HA小鼠脾细胞抗FⅧ免疫反应的主要信号通路及生物过程信息，并通过差异基因GO和KEGG富集分析以及单细胞转录组测序(ScRNA-seq),综合分析获得的细胞簇、基因和信号通路数据集，流式细胞术检测和分析脾脏滤泡辅助性T细胞(Tfh)和调节性T细胞(Treg)比例变化。结果:筛选获得抑制物组与对照组DEGs 3 731个，其中包括2 275个表达上调基因和1 456个表达下调基因，差异基因富集分析结果涉及辅助性T细胞分化和活化调节、细胞因子受体、T细胞受体信号通路、铁死亡等方面。ScRNA-seq降维聚类(UAMP)得到11个T/NK细胞亚群，经可视化呈现C-X-C趋化因子特异性受体基因cxcr5在其中的整体表达分布，以及cxcr5在抑制物模型鼠活化Tfh中高表达。UpSet plot展示Tfh和Treg存在交互作用，流式检测证实抑制物组脾脏CD4~+CXCR5~+PD-1~+ Tfh细胞比例增高，CD4~+CD25~+Foxp3~+ Treg细胞比例相对受抑。结论:脾细胞抗FⅧ免疫反应涉及多个免疫细胞亚群和信号通路分子，T细胞亚群Tfh/Treg及其相关调控分子在其中发挥重要作用，可能为今后HA合并抑制物患者免疫治疗提供潜在的生物学靶标。
关键词：血友病A;;抑制物;;凝血因子Ⅷ;;生物信息学;;RNA转录组测序
基金资助：国家自然科学基金面上项目(82370135);; 福建省科技创新联合资金项目(2020Y9056)
