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作者：王雅玲;孙瑞欣;赵琳;高枫;
单位：延安大学医学院;延安市神经科学重点实验室;
摘要：目的 通过大鼠多聚嘧啶区结合蛋白(PTBP)1基因沉默慢病毒载体，探究PTBP1基因沉默对大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞PC12细胞分化的影响。方法 根据PTBP1基因序列设计并合成干扰RNA(siRNA)序列，转染PC12细胞，通过Western印迹检测siRNA敲低PTBP1效率。筛选siRNA序列用于构建大鼠shPTBP1慢病毒载体。慢病毒感染PC12细胞，通过CCK-8检测细胞活性，Western印迹和免疫荧光检测PTBP1、微管相关蛋白(MAP2)、微管蛋白(β3-Tubulin)含量。结果 筛选出高效靶向PTBP1的siRNA序列；并成功构建相应shRNA慢病毒载体；shPTBP1慢病毒及对照组病毒感染PC12细胞3 d后，CCK-8检测结果显示，shPTBP1慢病毒可显著降低PC12细胞增殖能力(P<0.05);Western印迹结果显示，shPTBP1慢病毒感染PC12细胞，PTBP1蛋白水平显著降低，MAP2、β3-tubulin蛋白水平均显著升高；免疫荧光实验显示，PTBP1基因沉默后，MAP2、β3-tubulin荧光强度显著增加，神经元样细胞分化显著(P<0.05)。结论 大鼠shPTBP1慢病毒能促进PC12细胞向神经元方向分化。
关键词：多聚嘧啶区结合蛋白(PTBP)1;;慢病毒;;PC12细胞;;分化
基金资助：陕西省自然科学基金项目(2021SF-082)
