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作者：王端阳;王蕾;付栋彦;卢晓梅;赵丽东;郑嘉伟;于雅琳;王刚;杨林花;
单位：山西医科大学第二临床医学院(第二医院)血液科,山西医科大学出凝血疾病及恶性血液病研究中心;
摘要：目的:对VWF基因c.7332G>A无义突变进行遗传学分析，并探讨其分子致病机制。方法:使用VWF:Ag、VWF:RCo、FⅧ:C、多聚体分析对先证者进行表型诊断。采用NGS全外显子组测序对先证者进行基因型鉴定，并通过Sanger测序验证测序结果，同时对家系成员进行基因型鉴定。构建VWF基因c.7332G>A无义突变质粒，转染后进行体外细胞水平功能验证，通过qRT-PCR检测mRNA水平，Western blot检测蛋白表达水平，并通过多聚物分析验证多聚化功能。结果:先证者的VWF:Ag和VWF:RCo均≤3%,多聚体分析表现为多聚体缺失，诊断为3型VWD。基因测序检测到VWF基因c.7332G>A纯合无义突变。通过构建质粒进行体外细胞水平功能验证，结果显示突变型质粒的VWF基因mRNA水平下降，细胞上清中VWF蛋白表达量下降，突变体蛋白发生截短，导致VWF蛋白多聚化功能受损。结论:VWF基因43号外显子c.7332G>A纯合突变是导致先证者3型VWD的致病原因，该突变导致VWF基因mRNA水平下降，VWF蛋白表达量下降及VWF多聚化功能受损。
关键词：VWF;;下一代测序;;无义突变;;多聚体分析;;致病机制
基金资助：国家自然科学基金(81970172);; 山西省自然科学基金(20210302123295)
