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作者：廖明玥;龙玲玉;焦瑶;赵鸣悦;闫楠;周亚兰;韩朝悦;杨阳;赵晓甦;常英军;黄晓军;阮国瑞;
单位：北京大学人民医院,北京大学血液病研究所,国家血液系统疾病临床医学研究中心,血液肿瘤细胞和基因治疗北京市重点实验室;北大-清华生命科学联合中心,前沿交叉学科研究院;
摘要：目的：研发一种新的基于TaqMan-MGB探针的实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）检测方法，用于急性髓系白血病（AML）和慢性中性粒细胞白血病（CNL）患者CSF3R~(T618I)突变的初筛和随访监测。方法：利用PrimerExpressv3.0软件设计特定的引物和探针，并根据野生型（CSF3R~(wt)）和突变型（CSF3R~(T618I)）基因组DNA序列构建质粒标准品，绘制标准曲线，用于定量检测CSF3R~(T618I)突变。DNA样本来源于421例AML患者和12例CNL患者。结果：成功建立了一种利用TaqMan-MGB探针定量检测CSF3R~(T618I)突变的方法。在野生型背景下，CSF3R~(T618I)突变的检测灵敏度可达0.625%。本研究队列中，AML患者的CSF3R~(T618I)突变检出率为3.33%(14/421),CNL患者的突变检出率为83.33%(10/12)，与高深度靶区测序（TRS）和Sanger测序的结果高度一致。20名健康供者中均未检测到CSF3R~(T618I)突变。利用标准曲线计算突变阳性的CNL患者CSF3R~(T618I)等位基因突变频率平均值为（38.90±15.20）%，高于突变阳性AML患者的平均值[（21.72±16.11）%,P=0.015]。结论：基于TaqMan-MGB探针的qPCR是一种简便、灵敏的定量检测方法，可用于筛查CNL或AML患者中的CSF3R~(T618I)突变，有助于疾病的诊断以及治疗反应的监测。
关键词：急性髓系白血病;;慢性中性粒细胞白血病;;CSF3R~(T618I);;TaqMan-MGB探针;;qPCR
基金资助：国家自然科学基金（82570203）;国家自然科学基金重点项目（82293630）;; 国家重点研发计划（2022YFA1103300）
