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作者：于雅琳;李冰弦;付栋彦;王蕾;赵蛟宇;任娟;王端阳;曹佩琪;杨林花;王刚;
单位：山西医科大学第二临床医学院(第二医院)血液科,山西医科大学出凝血疾病及恶性血液病研究中心,血液病分子诊疗山西省重点实验室;
摘要：目的：探究1例由新发F11基因突变导致遗传性凝血因子Ⅺ（FⅪ）缺乏症的致病机制。方法：采用全外显子测序（NGS）鉴定突变位点，结合Sanger测序验证，检测凝血因子Ⅺ活性（FⅪ：C）与凝血因子Ⅺ抗原（FⅪ：Ag）。通过生物信息学工具预测突变致病性保守性，利用SWISS-MODEL和Pymol软件分析蛋白质的结构变化，探讨可能的分子致病机制。构建定点突变质粒，转染293T细胞（HEK293T），采用qRT-PCR及Westernblot评估F11基因mRNA水平及FⅪ蛋白表达量。利用CRISPRCas9构建稳定细胞株，研究突变的分子机制。结果：该患者FⅪ：C为1.54%，其F11基因第11号外显子存在纯合错义突变c.1249G>A(p.Gly417Arg)，预测致病分数为0.999。三维蛋白结构分析显示，417位的甘氨酸转变为精氨酸，氨基酸结构发生改变，氢键网络改变。qRT-PCR和Westernblot显示野生型与突变型细胞内F11mRNA与FⅪ蛋白表达水平差异无统计学意义，细胞上清中分泌的蛋白表达基本正常。稳定细胞株的qRT-PCR与Westernblot结果趋势与瞬时转染一致。结论：本例凝血因子Ⅺ缺乏症由F11基因第11号外显子的c.1249G>A(p.Gly417Arg)纯合错义突变导致，是国内外首次报道。
关键词：凝血因子Ⅺ缺乏症;;错义突变;;F11基因;;蛋白模型;;短回文重复序列
基金资助：国家自然科学基金（81700182）;; 山西省自然科学基金（20210302123295）
