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作者：林存哲;朱展兴;钟祺;张学瑞;刘圆圆;
单位：山东第一医科大学(山东省医学科学院)药学院;山东第一医科大学第二附属医院呼吸内科;
摘要：目的：研究Fas相关死亡结构域蛋白（FADD）对白血病细胞Jurkat细胞株中线粒体数量的调控作用。方法：通过慢病毒包装CRISPR/Cas9-FADD质粒，敲除Jurkat细胞株中的FADD基因。Westernblot检测病毒转染的Jurkat细胞中FADD、PGC1-α蛋白水平以及雷帕霉素诱导自噬之后LC3B/β-actin蛋白水平的表达量。并通过回补拯救实验，反向验证FADD对自噬的影响。qPCR对雷帕霉素诱导或氯喹抑制WTJurkat和FADD~(-/-)Jurkat细胞中mtCO1/β-globin进行相对定量。通过激光共聚焦显微镜和透射电镜分析WTJurkat和FADD~(-/-)Jurkat细胞不同条件诱导或抑制自噬后线粒体的数量变化。结果：FADD~(-/-)Jurkat细胞株中FADD基因缺失，且PGC1-α蛋白水平无明显变化。与WTJurkat细胞相比FADD~(-/-)Jurkat细胞中线粒体数量明显增加。WTJurkat细胞、FADD~(-/-)Jurkat细胞雷帕霉素诱导自噬之后，线粒体荧光明显减弱且mtCO1/β-globin的mRNA水平也明显下调。WTJurkat细胞氯喹抑制自噬之后线粒体荧光明显增强且mtCO1/β-globin的mRNA水平明显上调。通过相同处理的细胞样品，透射电镜分析WTJurkat细胞与FADD~(-/-)Jurkat细胞内线粒体的数量有一样的趋势。结论：在Jurkat细胞中FADD促进自噬发生，FADD被敲除之后线粒体发生堆积，诱导自噬可以减少线粒体数量。
关键词：Fas相关死亡结构域蛋白;;白血病细胞;;自噬;;线粒体
基金资助：山东省中医药科技项目（M-2022217）;; 泰安市科技创新发展项目（2021NS423）;; 山东省自然科学基金面上项目（ZR2022MC034）
