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作者：王凌燕;江佩芳;李佳蒸;陈艳欣;胡建达;
单位：福建医科大学附属协和医院血液科,福建省血液病学重点实验室,福建省血液病研究所;福建医科大学;福建医科大学附属第二医院;福建医科大学精准医学研究院;
摘要：目的:研究miR-155的表达与FLT3-ITD~+急性髓系白血病细胞系药物敏感性的关系及潜在的调控机制。方法:通过CRISPR/Cas9基因编辑工具在FLT3-ITD~+AML细胞系MV411中实现miR-155编码基因敲除，筛选单克隆细胞，PCR及Sanger测序鉴定单克隆细胞的基因型，实时荧光定量逆转录PCR鉴定成熟miRNA的表达水平。MTT法计算半数抑制率，比较MV411细胞对多柔比星、奎扎替尼以及米哚妥林的药物敏感性。转录组测序分析miR-155敲除后MV411细胞mRNA水平的变化，基因集富集分析获得miR-155敲除后的信号通路的变化水平，Western blot验证信号通路关键分子的表达。结果:通过PCR初筛和Sanger测序获得了4个基因敲除的杂合子和1个基因插入的杂合子。实时荧光定量逆转录PCR结果显示，这些单克隆细胞中成熟miR-155的表达显著低于野生型克隆。MTT结果显示，与野生型相比，miR-155基因敲除后MV411细胞对多种抗FLT3-ITD~+AML的药物敏感性有了显著增加。RNA测序显示miR-155敲除后mTOR信号通路和Wnt信号通路受到抑制。Western blot结果显示，信号通路关键分子p-mTOR、Wnt5α、β-catenin的表达下调。结论:miR-155敲除后能显著提升MV411细胞对多柔比星、奎扎替尼和米哚妥林的药物敏感性，这与包括mTOR及Wnt信号通路在内的多条信号通路的抑制有关。
关键词：miR-155;;FLT3-ITD~+急性髓系白血病;;多柔比星;;米哚妥林;;奎扎替尼
基金资助：国家自然科学基金(U2005204,82000142);; 福建省自然科学基金(2020J05050);; 福建医科大学启航基金项目(2018QH1036)
