来源：期刊VIP网 时间：
作者：田家仪;李佩霖;汤杰;许润香;尹博丰;王飞燕;李晓彤;宁红梅;朱恒;丁丽;
单位：河北北方学院研究生院;空军特色医学中心血液科;军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所;空军军医大学研究生院;安徽医科大学基础医学院;解放军总医院血液学部/解放军总医院第五医学中心南院区;
摘要：目的:建立小鼠急性移植物抗宿主病(aGVHD)骨髓微环境损伤的体外细胞模型并进行评价。方法:以6-8周龄雌性C57BL/6N小鼠作为骨髓和淋巴细胞的供体，6-8周龄雌性BALB/c小鼠作为aGVHD模型的受鼠。受鼠接受致死剂量(8.0 Gy, 72.76 cGy/min)γ射线全身照射后6-8 h内，尾静脉输注供鼠来源骨髓细胞(1×10~7/只),建立骨髓移植(BMT)组小鼠模型(n=20);尾静脉输注供鼠来源骨髓细胞(1×10~7/只)及脾脏淋巴细胞(2×10~6/只),建立小鼠aGVHD模型(n=20)。造模后d 7麻醉小鼠，摘取眼球取血，静置离心后吸取血清。分离小鼠间充质干细胞(MSC),分别用添加了2%、5%和10%的BMT组血清和相同浓度的aGVHD组血清的培养基进行培养。通过成纤维细胞集落形成实验(CFU-F)评价两组血清对MSC集落形成能力的影响；通过CD29和CD105免疫荧光染色评价两组MSC表面分子表达的差异；通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测MSC自我更新相关基因Oct-4、Sox-2和Nanog的表达情况。结果:成功建立起可以模拟小鼠aGVHD骨髓微环境损伤的体外细胞模型。CFU-F实验表明，在培养后d 7,与BMT组相比，aGVHD血清浓度为2%和5%时，MSC集落形成能力显著降低(P<0.05);在培养后d 14,与BMT组相比，不同aGVHD血清浓度组MSC集落形成能力均显著降低(P<0.05)。免疫荧光染色实验表明，MSC表面分子CD29~+和CD105~+细胞百分比在不同aGVHD血清浓度组较BMT组均降低，在aGVHD血清浓度为10%时差异最为显著(P<0.001,P<0.01)。RT-qPCR检测结果显示，aGVHD血清浓度组MSC自我更新相关基因Oct-4、Sox-2和Nanog表达下降，在aGVHD血清浓度为10%时差异最为显著(P<0.01,P<0.001,P<0.001)。结论:不同浓度的小鼠aGVHD血清和小鼠MSC共同培养，发现添加不同浓度的小鼠aGVHD血清MSC的自我更新能力受损程度不同，为开展aGVHD骨髓微环境损伤领域研究提供了新的工具。
关键词：辐射;;造血干细胞移植;;急性移植物抗宿主病;;骨髓微环境;;间充质干细胞;;自我更新
基金资助：国家干细胞重点研发专项(2022YFA1103500,2022YFA1104100);; 国家自然科学基金(82172388,81871771,81500083,81572159);; 北京自然科学基金(7242141,7192203,7182123,L212065)
