来源：期刊VIP网 时间：
作者：任春晓;赵莉;陈娴娴;田宇;赵恺;
单位：徐州医科大学血液病研究所;江苏省骨髓干细胞重点实验室;徐州医科大学附属医院血液科;
摘要：目的：探索C57BL/6J小鼠CD3~+T细胞体外刺激条件、最佳培养和感染时间，以期提高CD19嵌合抗原受体T细胞（m CD19 CAR-T）的感染效率。方法：将纯化的C57BL/6J小鼠CD3~+T细胞在包被CD3/CD28抗体（anti-CD3/CD28 coated）、包被CD3抗体+可溶性CD28抗体（anti-CD3 coated+soluble anti-CD28）和包被CD3抗体（anti-CD3 coated）3种不同条件下分别刺激12 h和24 h，后续培养24 h、48 h和72 h并记录细胞克隆数。在上述3种条件下分别刺激C57BL/6J小鼠CD3+T细胞12、24和36 h，然后加入白介素（IL）-2(100 U/ml)，镜下记录培养24 h、48 h和72 h的细胞克隆数；此条件下取刺激24 h的CD3+T细胞，感染m CD19 CAR-T逆转录病毒，制备m CD19 CAR-T细胞，流式检测48 h时3组中GFP+CAR-T细胞的百分率。结果：利用获得BALB/c小鼠m CD19 CAR-T细胞的最优化条件，制备C57BL/6J小鼠的m CD19 CAR-T细胞感染效率仅5.23%;anti-CD3+soluble anti-CD28 coated刺激C57BL/6J小鼠CD3~+T细胞24 h，终止刺激继续培养至48 h时细胞克隆数最高；在上述条件刺激24 h后加入IL-2培养48 h,anti-CD3+soluble anti-CD28 coated组T细胞增殖克隆数量显著增加，且CAR-T细胞感染效率为17.63%±4.17%。结论：C57BL/6J小鼠来源T细胞制备CAR-T细胞的最佳条件与BABL/c小鼠不同；anti-CD3+soluble anti-CD28 coated+IL-2刺激条件下诱导的T细胞感染逆转录病毒后可获得最高效率的m CD19 CAR-T细胞。
关键词：C57BL/6J小鼠;;CD19;;嵌合抗原受体T细胞
基金资助：国家自然科学基金(81800179);; 徐州市卫健委科技创新重点项目（XWKYHT20230064）;; 徐州市科技局推动创新专项资金重点研发计划（KC23246）;; 江苏省研究生科研与实践创新计划项目(KYCX20＿2485,KYCX21＿2686)
