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作者：赵善琛;李华;王萌;赵艺鸿;李先杰;金圣宇;
单位：延边大学附属医院血液内科;延边大学附属医院体检科;延边大学附属医院中心实验室;
摘要：目的：研究血管性血友病因子裂解酶（ADAMTS13）在无流体剪切力下裂解内皮细胞上特大血管性血友病因子（ULVWF）的分子机制，为探明血栓性血小板减少性紫癜（TTP）和其他血栓性疾病的发病机理提供理论依据。方法：通过免疫荧光显微镜观察ADAMTS13在无流体剪切力下裂解内皮细胞表面上ULVWF的情况，采用ELISA测定不同条件下培养基中VWF抗原量的变化。ELISA和Western blot分别测定有无流体剪切力或凝血因子VIII(FVIII)条件培养基中的VWF和蛋白水解片段的数量。多聚体分析评估ADAMTS13裂解内皮细胞上ULVWF的情况。将组胺刺激的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）与ADAMTS13和各种N-和C-末端截断的突变体一起孵育，通过免疫荧光显微镜观察与细胞保持结合的ULVWF,ELISA测定内皮细胞释放出的ULVWF，确定降解内皮细胞上ULVWF所需的ADAMTS13结构域。结果：在无流体剪切力下，重组ADAMTS13和血浆ADAMTS13迅速降解了内皮细胞表面上新形成的ULVWF。ULVWF的蛋白水解过程依赖于培养时间、ADAMTS13浓度和剪切力。ADAMTS13介导的蛋白水解释放的VWF分布与组胺刺激下内皮细胞分泌的VWF分布非常相似，提示ULVWF在内皮细胞表面发生裂解。裂解内皮细胞上ULVWF需要ADAMTS13半胱氨酸富集区（Cys-rich,Cys R）结构域和间隔区结构域，但不需要ADAMTS13的7个TSP1重复序列（TSP1 2-8）和2个补体结合区（CUB）结构域。结论：内皮细胞上ULVWF聚合物在无流体剪切力下也对ADAMTS13的裂解敏感，这为ADAMTS13裂解内皮细胞结合的ULVWF的分子机制提供了新见解，并可能有助于理解TTP和其他血栓性疾病的发病机理。
关键词：血管性血友病因子裂解酶;;血管性血友病因子;;血栓性血小板减少性紫癜
基金资助：国家自然科学基金(81660026,82060032);; 吉林省教育厅“十三五”科学技术研究项目[吉教科合字(2016)273号]
