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作者：张晓宇;李佩霖;汤杰;李志凌;郝瑞聪;李晓彤;张文静;赵世荣;丁丽;武文卿;朱恒;
单位：河北大学生命科学院;军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所;安徽医科大学;空军军医大学空军特色医学中心血液科;军事科学院军事医学研究院实验动物中心;
摘要：目的:从人脐带中分离制备一种具有抗氧化能力的间充质干细胞(antioxidantmesenchymal stem cell, AO-MSC)并评价其细胞生物学特性。方法:采用无血清培养体系，结合胶原酶消化培养法以及胶原酶消化组织块培养法，从人脐带华通氏胶组织分离培养MSC。使用0.2%Ⅱ型胶原酶消化，未完全消化的组织块贴壁培养收获AO-MSC。以常规消化培养法为对照。成纤维细胞集落形成实验检测MSC集落形成能力；CCK-8检测MSC增殖能力；流式细胞术及免疫荧光染色检测MSC表面标志物；体外诱导分化评价MSC成脂成骨能力，实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测成骨和成脂关键转录因子的表达差异；RT-qPCR检测MSC抗氧化还原物质SOD-1、GSH、GAT、NQO1的表达情况。结果:本策略分离的AO-MSC在18 d汇合率为80%-90%,细胞呈漩涡状生长。流式细胞术及免疫荧光染色检测结果显示，AO-MSC高表达CD73、CD29、CD105、CD90,低表达CD31、CD45、HLA-DR;胶原酶消化组织块培养法收获的AO-MSC自我更新及分化能力强于对照组MSC;对照组MSC体外成脂成骨能力强于胶原酶消化组织块培养法所得AO-MSC;RT-qPCR检测结果显示，胶原酶消化组织块培养法收获的AO-MSC其表达的抗氧化还原物质水平高于对照组。结论:成功制备了基于无血清体系的具备抗氧化能力的人脐带MSC。
关键词：脐带间充质干细胞;;华通氏胶;;无血清培养体系;;胶原酶消化组织块培养法;;抗氧化
基金资助：国家干细胞重点研发专项(2022YFA1103500,2022YFA1104100);; 国家自然科学基金(82172388,82372373,81871771,81500083,81572159);; 北京自然科学基金(7192203,7182123,L212065)
