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作者：邢晓娜;程宁;刘永民;
单位：安阳职业技术学院基础医学部;安阳市第三人民医院心内科;
摘要：目的 探讨芍药苷(PF)调控微小RNA(miR)-24表达对载脂蛋白E基因缺失(ApoE~(-/-))小鼠动脉粥样硬化斑块形成及氧化应激的影响。方法 实验分为野生型(WT)对照组、ApoE基因敲除(AKO)对照组、AKO+PF组、AKO+anti-miR-NC组、AKO+anti-miR-24组、AKO+PF+anti-miR-NC组、AKO+PF+anti-miR-24组各18只。WT对照组正常雄性小鼠普通饲料饲养；其余各组雄性ApoE~(-/-)小鼠高脂高胆固醇饲料饲养8 w制备动脉粥样硬化模型。建模型后，AKO+PF组灌胃60 mg/(kg·d) PF,AKO+PF+anti-miR-NC组、AKO+PF+anti-miR-24组灌胃60 mg/(kg·d) PF的同时尾静脉注射anti-miR-NC、anti-miR-24各50μl, AKO+anti-miR-NC组、AKO+anti-miR-24组内眦静脉注射anti-miR-NC、anti-miR-24各50μl, 1次/w,连续12 w。油红O染色观察整个主动脉斑块分布情况；苏木素-伊红(HE)染色检测主动脉根部形态，定量分析斑块比例；透射电镜观察主动脉管腔壁超微结构；全自动生化分析仪检测血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平；试剂盒检测主动脉中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、活性氧(ROS)和一氧化氮合酶(NOS)水平；实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测主动脉中miR-24表达；Western印迹检测主动脉中核转录因子红系2相关因子(Nrf)2、血红素氧合酶(HO)-1蛋白表达。结果 AKO对照组主动脉形态结构改变，内膜增生、增厚明显，出现明显的缺损及间断性钙化灶或坏死物。AKO+PF组主动脉形态较规则，粥样硬化斑块明显受到抑制，内膜增生较轻。AKO+anti-miR-24组较AKO对照组、AKO+PF+anti-miR-24组较AKO+PF组上述症状均严重。AKO+PF+anti-miR-24组较AKO+anti-miR-24组上述症状减轻。与WT对照组相比，AKO对照组血清中TC、TG、LDL-C水平、主动脉中ROS和NOS水平、MDA含量与动脉斑块比例升高，血清HDL-C水平，主动脉中SOD和GSH-Px活性、miR-24表达及Nrf2、HO-1蛋白表达明显降低(P<0.05);与AKO对照组相比，AKO+PF组血清中TC、TG、LDL-C水平、主动脉中ROS和NOS水平、MDA含量与动脉斑块比例明显降低，血清中HDL-C水平、主动脉SOD和GSH-Px活性、miR-24表达及Nrf2、HO-1蛋白表达明显升高(P<0.05);与AKO+PF组相比，anti-miR-24明显削弱了PF对血脂、氧化应激损伤和斑块比例的阻碍作用(P<0.05);与AKO+anti-miR-24组相比，PF可明显逆转anti-miR-24对血脂、氧化应激损伤和斑块比例的促进作用(P<0.05)。结论 PF能够上调miR-24表达降低TC、TG、LDL-C水平，进而缓解ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块形成及氧化应激，实现对动脉粥样硬化疾病的保护。
关键词：芍药苷;;微小RNA-24;;载脂蛋白E基因缺失;;动脉粥样硬化斑块;;氧化应激
基金资助：2019年河南省医学科技攻关计划(LHGJ20191277)
