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作者：钟天才;袁忠洪;缪瑞宇;
单位：遵义市第一人民医院泌尿外科;
摘要：目的 研究环状碳水化合物磺基转移酶(circCHST)15通过miR-296-5p/钾钙激活通道蛋白亚家族N成员(KCNN)4轴调节肾细胞癌免疫逃逸的机制。方法 体外培养人肾癌细胞OS-RC-2,随机分为对照组、circCHST15敲低组、miR-296-5p mimics组、共转染阴性对照组、circCHST15敲低+miR-296-5p inhibitor组，分组转染后，以实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和Western印迹检测各组细胞circCHST15、miR-296-5p及KCNN4表达；与体外分离培养的人外周血淋巴细胞共培养后检测人外周血淋巴细胞中活化CD8~+T细胞比例及其对OS-RC-2细胞杀伤率。将各组细胞接种在C57BL/6雄性小鼠右后腿背部皮下构建肾细胞癌移植瘤模型饲养4 w,检测各组移植瘤小鼠肿瘤体积；以免疫组化染色检测移植瘤小鼠肿瘤组织CD8~+T细胞浸润数；以双荧光素酶报告实验检测OS-RC-2细胞circCHST15对miR-296-5p、miR-296-5p对KCNN4的靶向调控。结果 与对照组相比，circCHST15敲低组、miR-296-5p mimics组细胞KCNN4蛋白与mRNA表达、移植瘤小鼠肿瘤体积明显降低(P<0.05),miR-296-5p表达、人外周血淋巴细胞中活化CD8~+T细胞比例、人外周血淋巴细胞对OS-RC-2细胞杀伤率、移植瘤小鼠肿瘤组织中CD8~+T细胞浸润数明显升高(P<0.05)。与circCHST15敲低组相比，circCHST15敲低+miR-296-5p inhibitor组细胞circCHST15表达无显著差异(P>0.05),KCNN4蛋白与mRNA表达、移植瘤小鼠肿瘤体积明显升高(P<0.05),miR-296-5p表达、人外周血淋巴细胞中活化CD8~+T细胞比例、人外周血淋巴细胞对OS-RC-2细胞杀伤率、移植瘤小鼠肿瘤组织中CD8~+T细胞浸润数明显降低(P<0.05);共转染阴性对照组各指标无显著差异(P>0.05)。OS-RC-2细胞中circCHST15靶向下调miR-296-5p、miR-296-5p靶向下调KCNN4。结论 敲低circCHST15可通过上调miR-296-5p而降低KCNN4表达，从而抑制CD8~+T细胞活化增殖及肿瘤浸润，增强其对肾细胞癌杀伤力，最终减轻肾细胞癌免疫逃逸。
关键词：环状碳水化合物磺基转移酶(circCHST)15;;miR-296-5p/钾钙激活通道蛋白亚家族N成员(KCNN)4;;肾细胞癌;;免疫逃逸
基金资助：遵义市科技计划项目(遵市科合HZ字(2021)263号)
