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作者：凌亚亭;蔡杰;张钰;傅强;何成涛;
单位：南京红十字血液中心;
摘要：目的：对1例血型血清学检测为D变异型的标本进行基因分型，并进行家系调查分析。方法：运用血清学方法对先证者及其家系标本进行RhD确认及RhD抗原表位检测；用PCR-SSP法分析RHD基因合子型，并对RHD基因初步分型；用Sanger测序和单分子实时测序法对先证者及其家系标本进行RHD基因1-10外显子和全基因组测序分析；通过AlphaFold3软件构建突变前后的蛋白三级结构模型，分析突变后该氨基酸与周围氨基酸相互作用的改变；利用在线软件预测突变导致的氨基酸替换对RhD蛋白功能的影响。结果：先证者母亲血型血清学结果为RhD阴性，其他抗原为CCee,RHD外显子测序结果基因型为RHD*01N.03/RHD*01N.01杂合子；先证者及其父亲血型血清学结果为D变异型，其他抗原均为CcEe,PCR-SSP法初步鉴定为RhD杂合型。先证者及其父亲RHD基因1-10外显子测序和全基因组测序结果显示，第2外显子发生c.179T>C突变，第9外显子发生c.1154-31T>C突变。AlphaFold3建模预测Ile-60残基与Val-56残基间疏水接触的丧失导致蛋白稳定性降低。3种蛋白功能损伤预测软件中，有2种提示该突变对RhD蛋白功能可能有害。结论：先证者基因型为RHD*01N.01/RHD*(c.179T>C,c.1154-31T>C)杂合型，p.Ile60Thr突变导致氨基酸内部分子间作用力发生改变，从而引起突变后蛋白质结构和功能的部分改变。
关键词：D变异型;;家系分析;;弱D;;DNA测序;;血型血清学
