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作者：李梦珂;李素新;李渊;
单位：南阳市第一人民医院肝胆病诊疗中心外科病区;郑州大学第一附属医院肝胆胰外科;
摘要：目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)DLGAP1反义RNA(DLGA P1-AS)1/微小RNA(miR)-138-5p/DNA甲基转移酶(DNMT)3A轴调控胆囊癌细胞生物学行为的作用机制。方法 收集胆囊癌(GBC)患者(85例)的GBC组织及相对应癌旁组织。体外培养人GBC细胞GBC-SD,根据不同处理分为Con组、si-NC组、si-DLGAP1-AS1组、si-DLGAP1-AS1+anti-miR-138-5p组、si-DLGAP1-AS1+pcDNA-DNMT3A组、miR-NC组、miR-138-5p组、anti-miR-NC组、anti-miR-138-5p组、miR-NC+WT-DLGAP1-AS1组、miR-138-5p+WT-DLGAP1-AS1组、miR-NC+MUT-DLGAP1-AS1组、miR-138-5p+MUT-DLGAP1-AS1组、miR-NC+WT-DNMT3A组、miR-138-5p+WT-DNMT3A组、miR-NC+MUT-DNMT3A组、miR-138-5p+MUT-DNMT3A组。采用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测lncRNA DLGAP1-AS1、miR-138-5p和DNMT3A mRNA在GBC组织及各组GBC-SD细胞中的表达；Western印迹检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、DNMT3A、血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)、MMP-9、血管内皮生成因子(VEGF)蛋白表达。双荧光素酶报告实验验证LncRNA DLGAP1-AS1与miR-138-5p、miR-138-5p与DNMT3A的靶向关系；GBC-SD细胞增殖活性、细胞克隆形成数、细胞迁移能力、细胞侵袭能力、血管生成拟态(VM)管腔数量分别用CCK-8、平板克隆实验、细胞划痕实验、Transwell小室实验、三维培养法检测。结果 与癌旁组织相比，GBC组织中LncRNA DLGAP1-AS1、DNMT3A mRNA、DNMT3A蛋白表达明显升高，miR-138-5p表达明显降低(P<0.05)。LncRNA DLGAP1-AS1可靶向调控miR-138-5p表达，miR-138-5p可靶向调控DNMT3A蛋白表达。si-DLGAP1-AS1组LncRNA DLGAP1-AS1、DNMT3A蛋白表达较Con组、si-NC组低，miR-138-5p表达高于si-NC组、Con组，差异显著(P<0.05);miR-138-5p表达在si-DLGAP1-AS1+anti-miR-138-5p组较si-DLGAP1-AS1组低，DNMT3A蛋白表达在si-DLGAP1-AS1+anti-miR-138-5p组较si-DLGAP1-AS1组高，差异显著(P<0.05);与si-DLGAP1-AS1组相比，DNMT3A蛋白表达水平在si-DLGAP1-AS1+pcDNA-DNMT3A组较高，差异显著(P<0.05);si-DLGAP1-AS1组细胞中MMP-2、细胞克隆形成数、VE-cadherin、划痕愈合率、MMP-9、VEGF蛋白表达、24、48、72 h吸光度值、侵袭细胞数、VM管腔数较Con组、si-NC组低，差异显著(P<0.05);与si-DLGAP1-AS1组相比，si-DLGAP1-AS1+anti-miR-138-5p组、si-DLGAP1-AS1+pcDNA-DNMT3A组细胞中MMP-2、划痕愈合率、细胞克隆形成数、VE-cadherin、VM管腔数、侵袭细胞数、MMP-9、VEGF蛋白表达、24、48、72 h吸光度值明显升高(P<0.05)。结论 LncRNA DLGAP1-AS1可能通过miR-138-5p/DNMT3A轴调控GBC-SD细胞的生物学行为。
关键词：胆囊癌;;长链非编码RNA DLGAP1反义RNA(DLGAP1-AS)1;;微小RNA-138-5p;;DNA甲基转移酶3A;;增殖;;迁移;;侵袭;;血管生成拟态
基金资助：2023年度河南省重点研发与推广专项项目(232300420232)
