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作者：项薇;刘卓;邓兵梅;黎振声;邓文婷;周友田;
单位：中国人民解放军南部战区总医院神经内科;
摘要：目的 探讨let7i在重组组织型纤溶酶原激活剂(rtPA)治疗相关的脑血管内皮细胞损伤中的作用。方法 建立大鼠脑微血管内皮细胞(RBMECs)氧糖剥夺(OGD)及rtPA溶栓模型，实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测rtPA治疗后RBMECs中let7i表达。将RBMECs分为对照组、OGD组、OGD+rtPA组、OGD+rtPA+let7i组(过表达let7i组)。乳酸脱氢酶(LDH)法及cellTiter96AQ单溶液细胞增殖(MTS)法分别检测各组RBMECs细胞活性及死亡，TUNEL法检测细胞凋亡，Transwell法检测单层RBMECs细胞通透性及细胞跨内皮电阻(TEER)。qRT-PCR及Western印迹分别检测各组半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、基质金属蛋白酶(MMP)9、紧密连接蛋白mRNA及蛋白表达。结果 rtPA处理后RBMECs细胞中let7i表达明显降低(P<0.05)。与OGD组相比，OGD+rtPA组RBMECs存活率降低，死亡增多、凋亡率增高，细胞通透性增高、TEER降低，差异有统计学意义(P<0.05)。过表达let7i可抑制rtPA处理后RBMECs细胞的死亡、凋亡，降低细胞通透性，增加TEER,差异有统计学意义(P<0.05)。与OGD组相比，OGD+rtPA组caspase-3、iNOS、MMP9 mRNA及蛋白表达升高，紧密连接蛋白occludin、claudin-5、ZO-1mRNA及蛋白表达降低，差异有统计学意义(P<0.05)。与OGD+rtPA组相比，OGD+rtPA+let7i组caspase-3、iNOS、MMP9mRNA及蛋白表达降低，occludin、claudin-5、ZO-1mRNA及蛋白表达升高，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 过表达let7i可减少rtPA处理后RBMECs的死亡，抑制细胞凋亡、降低细胞通透性，其作用与降低凋亡相关分子caspase-3及炎症因子iNOS、MMP9表达有关，提示let7i在rtPA治疗相关的脑血管内皮细胞损伤中起抗凋亡、抗炎作用。
关键词：缺血性脑卒中;;重组组织型纤溶酶原激活剂(rtPA);;脑血管内皮细胞;;微小RNA
基金资助：广州市科技计划项目(202102080514)
