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作者：董政;吴海龙;范渊;周锐;
单位：武汉市第四医院普外科;
摘要：目的 探讨花旗松素(Tax)调节T细胞免疫球蛋白及黏蛋白结构域(TIM)3/半乳糖凝集素(Gal)9信号轴对肝细胞癌(HCC)凋亡、增殖和免疫逃逸的作用。方法 实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western印迹测量HCC细胞中TIM3、Gal9 mRNA及蛋白水平差异；MTT法分析0、5、10、20、40、80μmol/L Tax处理对细胞增殖的影响，以确定Tax的最佳作用浓度；将AGS细胞分成Tax组、pcDNA组(转染pcDNA+40μmol/L Tax)、pcDNA-TIM3组(转染pcDNA-TIM3+40μmol/L Tax)和control组，5-乙炔基-2′-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色、流式细胞术测定细胞增殖和凋亡；Western印迹测定增殖细胞核抗原(PCNA)、程序性死亡配体(PD-L)1、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及TIM3、Gal9蛋白表达；构建HCC移植瘤模型，免疫组化法检测移植瘤组织Ki-67蛋白表达、CD8~+T细胞浸润数；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测移植瘤组织中干扰素(IFN)-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平。结果 TIM3、Gal9 mRNA及蛋白表达在HCC细胞中显著上调(P<0.05);与control组比较，Tax组HepG2细胞中TIM3、Gal9 mRNA、Edu阳性率、PD-L1、PCNA、Gal9、TIM3蛋白水平明显下降，凋亡率、Bax蛋白水平明显上升(P<0.05);与pcDNA组比较，pcDNA-TIM3组Edu阳性率、Gal9、TIM3 mRNA、PD-L1、PCNA、Gal9、TIM3蛋白水平明显上升，凋亡率、Bax蛋白水平明显下降(P<0.05);体内实验表明，Tax显著降低移植瘤质量、体积及Ki-67表达，显著升高IFN-γ、TNF-α水平及CD8~+T细胞浸润数(P<0.05);与pcDNA组比较，pcDNA-TIM3组上述指标均呈明显相反趋势(P<0.05)。结论 Tax可能通过阻断TIM3/Gal9信号通路，减少肿瘤免疫逃逸，进而诱导HCC细胞凋亡并抑制细胞增殖。
关键词：花旗松素;;黏蛋白结构域(TIM3)/半乳糖凝集素(Gal)9信号轴;;肝细胞癌;;增殖;;凋亡;;免疫逃逸
基金资助：2020年度武汉市临床医学科研项目(WX20B15)
