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作者：刘健;李辉;李晶;赵晓慧;陈楠;王舒婷;李娜;杨擎;
单位：长春中医药大学吉林省人参科学研究院;吉林省前卫医院外科;新加坡国立大学杨潞龄医学院;
摘要：目的 探讨人参皂苷CK介导BV2细胞吞噬和清除β-淀粉样蛋白(Aβ)的作用，并阐明其机制。方法 利用疾病靶点数据库搜集阿尔茨海默病(AD)相关靶点并对AD进行基因本体论(GO)分析，利用STRING数据库对相关靶点进行蛋白-蛋白互作(PPI)网络分析，通过分子模拟评估CK和髓系细胞触发受体(TREM)2的结合亲和力。将BV2细胞分为Control组、Aβ组、si-TREM2组、Aβ+CK组与Aβ+CK+si-TREM2组。利用Aβ_(42)寡聚体建立体外模型，MTT法检测BV2细胞活力，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-4与转化生长因子(TGF)-β的分泌水平。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测BV2细胞的TREM2 mRNA表达水平。Western印迹检测各组TREM2、DNAX活化蛋白(DAP)12、脾酪氨酸激酶(SYK)、磷酸化脾酪氨酸激酶(p-SYK)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、苄氯素(Beclin)-1、p62、微管相关蛋白轻链3(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)蛋白表达水平。免疫荧光法检测BV2细胞的巨噬细胞抗原CD68、甘露糖受体(CD206)、Aβ、TREM2、溶酶体相关膜蛋白(LAMP)-1与LAMP-2表达。Lyso-Tracker检测各组BV2细胞的溶酶体功能。结果 GO分析显示，AD发病过程中TRME2起到关键作用，并且CK可以很好地与TREM2进行结合。与Aβ组比较，CK能够提高BV2活力和TREM2、DAP12、p-SYK、CD206、Beclin-1与LC3-Ⅱ/Ⅰ表达，促进IL-4、TGF-β分泌及BV2细胞吞噬Aβ,减少IL-6与TNF-α分泌，降低CD68、p-mTOR与p62表达，改善BV2溶酶体的功能，提高LAMP-1与LAMP-2表达，差异显著(P<0.05)。但是与Aβ+CK组相比，Aβ+CK+siTREM2组CK在BV2细胞中无法发挥上述作用。结论 人参皂苷CK可促进BV2细胞从M1表型向M2表型极化，提高BV2细胞对Aβ的吞噬能力，提高细胞自噬水平，增强溶酶体功能，其机制可能与激活TREM2/DAP12/SYK信号通路有关。
关键词：人参皂苷CK;;阿尔茨海默病;;β-淀粉样蛋白;;BV2细胞;;髓系细胞触发受体2;;吞噬
基金资助：国家自然科学基金项目(U24A20646);; 吉林省科技厅科技发展计划项目(YDZJ202301ZYTS466)
