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作者：王鹏;张曾;雷天意;余玲;郭建伟;余湘;张全波;青玉凤;
单位：川北医学院附属医院高尿酸血症与痛风研究中心;川北医学院附属医院老年科;川北医学院附属医院风湿免疫科;川北医学院附属医院川北医学院基础与法医学院;
摘要：目的 研究微小RNA(miR)-182-5p调控自噬相关基因ATG16L1介导的自噬对痛风炎症的影响。方法 收集急性期痛风(AG)患者、间隙期痛风(IG)患者和健康志愿者(HC)外周静脉血各30例，检测自噬相关基因ATG16L1 mRNA及蛋白、微管相关蛋白1轻链(LC)3 mRNA及LC3Ⅱ蛋白表达水平。生物信息学分析及荧光素酶报告基因检测miR-182-5p和ATG16L1的靶向调控关系。单钠尿酸盐(MSU)刺激THP1巨噬细胞建立急性痛风炎症模型。将siRNA-ATG16L1、siRNA-NC、miR-182-5p mimic、miR-182-5p-NC分别转染至THP1巨噬细胞，分别记为si-ATG16L1组、si-NC组、miR-mimic组、miR-NC组；将miR-182-5p mimic与siRNA-ATG16L1共转染至THP1巨噬细胞中，记为miR-mimic+si-ATG16L1组，未转染则记为control组；转染均采用脂质体法。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-182-5p、ATG16L1、LC3及IL-1β mRNA表达；Western印迹检测ATG16L1、LC3Ⅱ蛋白表达；酶联免疫吸附试验(ELSIA)检测细胞上清液中IL-1β水平。结果 AG组血尿酸、白细胞、中性粒细胞绝对值水平明显高于IG、HC组(均P<0.05)。AG组ATG16L1 mRNA表达显著低于HC组(P<0.001),但与IG组相比差异无统计学意义(P>0.05)。AG组ATG16L1蛋白表达明显低于IG、HC组(均P<0.01)。荧光素酶报告基因检测证实，miR-182-5p能靶向结合ATG16L1 3′非编码区(UTR)。在急性痛风炎症模型中，敲低ATG16L1,LC3、IL-10 mRNA表达明显降低，IL-1β mRNA表达明显增加(P<0.001);过表达miR-182-5p, ATG16L1、LC3、IL-10 mRNA表达明显降低(均P<0.05),IL-1β、TNF-α mRNA表达明显增加(均P<0.01);共转染miR-182-5p mimic、si-ATG16L1后，ATG16L1、LC3、IL-1β mRNA及ATG16L1、LC3Ⅱ蛋白表达与si-ATG16L1组结果一致。结论 miR-182-5p靶向抑制ATG16L1表达，下调自噬水平，促进痛风炎症。
关键词：微小RNA(miR)-182-5p;;自噬相关基因ATG16L1;;自噬;;痛风
基金资助：国家自然科学基金(81974250);; 四川省南充市科技项目(20SXQT0308,20SXCXTD0002);; 川北医学院附属医院科研项目(2022ZD003)
