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作者：肖瑶;左智;于然;纪铭月;陈皓瑜;李庆菊;宋坚;陈佳佳;王万鹏;
单位：南京医科大学康达学院附属涟水人民医院;南京医科大学第一附属医院(江苏省人民医院)心内科;扬州大学医学院临床学院江苏省中西医结合老年病防治重点实验室;
摘要：目的 探究小檗碱(BBR)抑制碘佛醇诱导的人肾小管上皮细胞株HK-2细胞损伤的作用及潜在机制。方法 HK-2细胞分为4组，对照(Con)组不进行特殊处理，碘佛醇刺激(Mod)组使用50 mg/ml碘佛醇作用24 h, BBR治疗(M+B)组使用50 mg/ml碘佛醇和30μmol/L BBR作用24 h,二甲基亚砜(DMSO)组使用50 mg/ml碘佛醇和与BBR等剂量的DMSO处理。细胞计数(CCK-8)用于评估HK-2细胞增殖；流式细胞术用于检测HK-2细胞凋亡及HK-2细胞中活性氧(ROS)和二价铁离子(Fe~(2+))含量；谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒用于测定细胞内GSH含量；Western印迹实验用于检测B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、蛋白胱氨酸/谷氨酸逆向转运蛋白(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)4、Kelch样ECH相关蛋白(Keap)1、核因子E2相关因子(Nrf2)、磷酸化(p)-叉头蛋白(Fox)o3a和Foxo3a表达水平。结果 0～100μmol/L的BBR和等剂量的DMSO对HK-2细胞活力无显著影响(均P>0.05),50和100 mg/ml的碘佛醇诱导HK-2细胞死亡，而30μmol/L BBR能够显著保护HK-2细胞免受碘佛醇诱导的死亡(均P<0.05);凋亡检测显示碘佛醇能够显著诱导HK-2细胞发生凋亡(P<0.05),BBR治疗能够显著抑制碘佛醇诱导的凋亡(P<0.05),但DMSO对碘佛醇诱导的细胞凋亡无显著作用(P>0.05);ROS检测显示，碘佛醇处理的HK-2细胞中ROS含量明显增加(P<0.05),BBR治疗能够明显降低ROS含量(P<0.05);GSH检测显示，与Con组相比，Mod组GSH含量明显增加，M+B组中GSH含量较Mod组明显减少(均P<0.05);与Con组相比，Mod组中Fe~(2+)含量明显增加，M+B组Fe~(2+)含量较Mod组明显减少(均P<0.05);Western印迹显示，与Con组相比，Mod组Bcl-2、SLC7A11、GPX4、Keap1、Foxo3a蛋白表达明显下降，而p-Foxo3a和Nrf2蛋白表达明显增加(均P<0.05)。与Mod组相比，M+B组中Bcl-2、SLC7A11、GPX4、Nrf2和Foxo3a蛋白表达明显增加，而Keap1、p-Foxo3a蛋白表达明显下降(均P<0.05)。结论 BBR抑制碘佛醇诱导的HK-2细胞氧化应激、凋亡和铁死亡，其机制是BBR促进Foxo3a/Keap1/Nrf2调控轴活化。
关键词：小檗碱;;造影剂肾病;;铁死亡;;凋亡;;叉头蛋白o3a
基金资助：国家自然科学基金资助项目(82200387,81600549);; 江苏省卫生健康委科研项目(Z2021059);; 江苏省中西医结合老年病防治重点实验室开放课题立项(202117,202202,202203);; 淮安市自然科学研究计划(联合专项HABL202260);; 南京留学人员科技创新项目择优资助项目(C-174)
