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作者：李媛;马蕾;李娜;王静;胡海友;付芳惠;马光辉;
单位：滨州医学院附属医院皮肤性病科;
摘要：目的 探究微小RNA(miR)-195-5p过表达对黑色素瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及上皮-间质转化(EMT)的影响及作用机制。方法 利用TargetScan7.2数据库预测miR-195-5p和One cut结构域家族成员(ONECUT)2基因的结合位点，将ONECUT2-pcDNA和miR-195-5p mimic单独或联合转染至黑色素瘤A375细胞，双荧光素酶报告实验验证靶向关系，RT-PCR检测miR-195-5p、ONECUT2表达，将A375细胞分为对照(NC)组、miR-195-5p mimic组(转染miR-195-5p mimic)、ONECUT2-pcDNA组(转染ONECUT2-pcDNA)和miR-195-5p mimic+ONECUT2-pcDNA(miR-195-5p mimic、ONECUT2-pcDNA共转染)组，并检测细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移情况，观察细胞形态学变化，Western印迹检测增殖相关蛋白Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-3和EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(cadherin)、N-cadherin、波形蛋白(Vinmentin)表达。结果 TargetScan预测miR-195-5p与ONECUT2之间具有结合位点，双荧光素酶报告实验验证miR-195-5p与ONECUT2存在靶向关系；与NC组比较，miR-195-5p能显著抑制A375细胞ONECUT2蛋白和mRNA表达、A375细胞增殖、侵袭、迁移和EMT,显著促进A375细胞凋亡，显著上调活化的(Cleaved) caspase-3、E-cadherin蛋白表达，显著下调Ki67、PCNA、N-cadherin和Vinmentin蛋白表达，显著提升Bax/Bcl-2和Cleaved caspase-3/caspase-3比率(P<0.05),而过表达ONECUT2可显著逆转miR-195-5p对A375细胞生物学行为的作用(P<0.05)。结论 过表达miR-195-5p可抑制黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭及EMT,促进其凋亡，可能与靶向调控ONECUT2表达相关。
关键词：微小RNA(miR)-195-5p;;One cut结构域家族成员(ONECUT)2;;黑色素瘤;;细胞增殖;;细胞凋亡;;细胞迁移;;细胞侵袭;;上皮-间质转化
基金资助：山东省医药卫生科技发展计划项目(2019WS326)
