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作者:李进;李杨;于佩灵;
单位:辽宁中医药大学发展研究中心;北京市丰台右安门医院中医科;辽宁中医药大学附属第二医院中医科;
摘要:目的 观察蒙药红花对肝癌细胞的作用,发现其潜在机制。方法 体外实验:使用小鼠肝癌Hepa1-6细胞作为实验细胞,根据噻唑蓝(MTT)实验测定不同组别的细胞活性,确定蒙药红花对Hepa1-6细胞影响的最佳浓度时,再将细胞分为空白组、蒙药红花组、索拉菲尼组、红花+索拉菲尼组,比较不同组别的细胞活性及Western印迹检测核因子(NF)-κB、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6蛋白表达情况。体内实验:使用50只C57BL/6小鼠构建肝癌移植瘤模型,将造模完成后的小鼠随机分为空白组、模型组、红花低、高剂量组、索拉菲尼组。随后使用红花及索拉菲尼对其干预。随后,记录各组体质量情况,同时使用苏木素-伊红(HE)染色观察其肝细胞的病理形态,同时使用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组血清相关指标表达;Western印迹检测NF-κB、TNF α、IL-6蛋白表达情况。结果 经不同浓度的红花提取物干预小鼠Hepa1-6肝癌细胞作用后表现出相应的细胞抑制作用,并伴随红花提取物浓度的增加,抑制作用增加明显,与红花提取物浓度剂量正相关性。红花提取物与其细胞活力抑制情况呈正相关性,即浓度越高活力被抑制的更低。与空白组比较,红花组、索拉菲尼组及红花+索拉菲尼组Hepa1-6细胞抑制率明显升高,NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白表达明显降低(P<0.001);红花+索拉菲尼组Hepa1-6细胞中的抑制率明显高于红花组,NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白表达明显低于红花组(P<0.05,P<0.01)。HE染色显示模型组肝脏中可见明显的坏死灶,且肝细胞呈空泡样变,经红花提取物干预后,肝脏细胞排列紧密,其炎症浸润程度降低,肝细胞肿胀及空泡样变化有所减轻,且高剂量红花提取物干预后效果最好。与空白组比较,模型组丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙二醛(MDA)、NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白表达明显升高,超氧化物歧化酶(SOD)水平、体质量明显降低(P<0.001);与模型组相比,红花低、高剂量组、索拉非尼组ALT、ALP、MDA水平明显降低,SOD水平、体质量明显升高;红花高剂量组、索拉非尼组NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白表达明显降低(P<0.01,P<0.001)。结论 蒙药红花提取物可明显抑制小鼠肝细胞癌Hepa1-6细胞的活性,且其可以明显抑制小鼠肝细胞癌癌症机体的发展,其机制可能抑制NF-κB的蛋白表达相关,可以为临床患者的诊疗病情提供新的思路及临床依据。
关键词:蒙药;;红花;;核因子(NF)-κB信号通路;;肝细胞癌
基金资助:辽宁中医药大学科研基金项目(2021LZY014)