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作者：梁冰;张丽柯;张振;李芳芳;杨清乐;潘平;
单位：南阳市第一人民医院肿瘤内科;河南省胃癌耐药机制及临床转化工程研究中心;
摘要：目的 研究苦豆碱调节程序性细胞死亡蛋白(PD)-1/程序性死亡配体(PD-L)1信号通路对胃癌细胞增殖、凋亡及免疫逃逸的影响。方法 体外培养人胃癌细胞株MGC803,以0.5、1.0、2.0、3.0 mmol/L苦豆碱干预后以CCK-8法筛选其最佳作用浓度。将MGC803细胞随机分为对照组、苦豆碱组、PD-1敲低组、空载组、苦豆碱+PD-1过表达组，以苦豆碱和慢病毒质粒分组干预后以Western印迹法检测各组细胞PD-1/PD-L1通路蛋白表达；以CCK-8法、5-乙炔基-2′-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色和流式细胞实验分别检测各组细胞增殖、凋亡；以Western印迹法检测各组细胞增殖[细胞增殖核抗原(Ki)67、细胞周期蛋白(Cyclin)D1]及凋亡[B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关X蛋白、活化的胱天蛋白酶(cleaved Caspase)-3]相关蛋白表达。采用不同比例的人外周血单个核细胞(PBMC)与各组MGC803细胞共培养后，通过CCK-8法测定PBMC对各组MGC803细胞的杀伤效率；以流式细胞实验检测PBMC中活化CD8~+T细胞比例。结果 相比对照组，苦豆碱组、PD-1敲低组细胞活性、EdU阳性率、PD-1、PD-L1、Ki67与CyclinD1蛋白表达明显降低，而凋亡率、Bax与cleaved Caspase-3蛋白表达、PBMC对MGC803细胞的杀伤率、活化CD8~+T细胞比例明显升高(P<0.05);空载组细胞以上各指标相比对照组无明显变化(P>0.05)。相比苦豆碱组，苦豆碱+PD-1过表达组细胞活性、EdU阳性率、PD-1、PD-L1、Ki67与CyclinD1蛋白表达明显升高，而凋亡率、Bax与cleaved Caspase-3蛋白表达、PBMC对MGC803细胞的杀伤率、活化CD8~+T细胞比例明显降低(P<0.05)。结论 苦豆碱可通过下调PD-1/PD-L1通路蛋白表达来抑制胃癌细胞增殖和免疫逃逸，并促进其凋亡。
关键词：苦豆碱;;程序性细胞死亡蛋白(PD)-1/程序性死亡配体(PD-L)1;;胃癌;;增殖;;凋亡;;免疫逃逸
基金资助：河南省医学科技攻关计划项目(LHGJ20200903)
