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作者：刘媛媛;王磊;马磊;郝清华;薛寿儒;蔡增林;宋正锋;
单位：徐州医科大学附属滕州市中心人民医院神经内科;徐州医科大学附属滕州市中心人民医院泌尿外科;苏州大学附属第一医院神经内科;南京医科大学附属苏州科技城医院神经内科;
摘要：目的 比较不同浓度外源性毒素1-甲基-4-苯基吡啶(MPP~+)及E3泛素链接酶SIAH-1抗体作用于PC12细胞活力的变化并筛选最佳浓度，探讨最佳浓度MPP~+及SIAH-1抗体对PC12细胞中α-突触核蛋白(synuclein)和SIAH-1表达的影响。方法 选取PC12细胞，采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力，据细胞存活能力筛选MPP~+及SIAH-1抗体作用于细胞的最佳浓度；分为A实验组：对照组、MPP~+(0.25、0.50、0.75、1.00 mmol/L)组；B实验组：对照组、SIAH-1抗体(1、2、4、8μg/ml)组。从A、B两组中选取影响PC12细胞活力的MPP~+最佳浓度(MPP~+opt)与SIAH-1抗体最佳浓度(anti-SIAH-1opt),进入C实验组：对照组、MPP~+opt组、anti-SIAH-1opt组、MPP~+opt+anti-SIAH-1opt组，使用光学显微镜观察各组细胞形态差异并用MTT法检测各组细胞活力，运用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测各组细胞中α-synuclein和SIAH-1 mRNA表达。结果 A实验组：0.75 mmol/L MPP~+组细胞活力最接近半抑制浓度(IC50),且显著低于对照组、0.25、0.50 mmol/L MPP~+组(P<0.001)。B实验组：各浓度anti-SIAH-1均显著提高PC12细胞活力(F=32.37,P<0.001)。确定MPP~+opt浓度为0.75 mmol/L、anti-SIAH-1opt浓度为4μg/ml进入C实验组：MPP~+opt+anti-SIAH-1opt组细胞活力明显高于对照组、MPP~+opt组，但显著低于anti-SIAH-1opt组(P<0.005);C实验组光镜下anti-SIAH-1opt组PC12细胞生长状态较优，MPP~+opt+anti-SIAH-1opt组与对照组良好，MPP~+opt组生长状态欠佳。α-synuclein mRNA相对表达量：与对照组相比，MPP~+opt组显著高表达，anti-SIAH-1opt组明显低表达(P<0.05)。SIAH-1 mRNA相对表达量：与对照组相比，MPP~+opt组显著高表达，anti-SIAH-1opt组及MPP~+opt+anti-SIAH-1opt组显著低表达(P<0.05);各组中α-synuclein mRNA与SIAH-1 mRNA表达均分别呈正相关(r=0.82、0.70、0.71,P=0.001 1、0.011 7、0.010 1)。结论 MPP~+降低PC12细胞活力的最佳浓度为0.75 mmol/L,anti-SIAH-1提高PC12细胞活力的最佳浓度为4μg/ml, anti-SIAH-1opt组细胞形态最优，两者最佳浓度的确定为进行PC12细胞在帕金森病(PD)中的基础研究提供了理论基础。MPP~+可使PC12细胞中α-synuclein与SIAH-1高表达，而加入anti-SIAH-1后能逆转并使α-synuclein与SIAH-1表达降低，SIAH-1与α-synuclein表达呈正相关，两者在PD发病机制中起重要作用，有望成为治疗PD的一组重要潜在靶点。
关键词：1-甲基-4-苯基吡啶(MPP~+);;E3泛素链接酶SIAH-1;;PC12细胞;;α-突触核蛋白(synuclein);;帕金森病(PD)
基金资助：徐州医科大学附属医院发展基金项目(XYFY202214)
