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作者：王其亮;孙拥华;孙玥;陈鹏;
单位：青岛市中医医院青岛大学附属青岛市海慈医院药剂科;青岛市中医医院青岛大学附属青岛市海慈医院普外科;康复大学青岛中心医院(青岛市中心医疗集团)胸外科;
摘要：目的 基于核因子E2相关因子(NRF)2/血红素氧合酶(HO)-1/谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)4信号通路探讨芬戈莫德通过调控受体相互作用丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(RIPK)1表达对肺癌细胞生物学行为、氧化应激及铁死亡的影响。方法 取对数生长期BEAS-2B细胞正常培养不做任何处理，记为BEAS-2B组。取对数生长期A549细胞分为A549组(正常培养)、si-NC组(转染si-NC)、si-RIPK1#1组(转染si-RIPK1#1)、si-RIPK1#2组(转染si-RIPK1#2)、FTY720组(100 nmol/L芬戈莫德)、FTY720+si-NC组(基于FTY720组转染si-NC)、FTY720+si-RIPK1组(基于FTY720组转染si-RIPK1#2)。细胞计数试剂盒8检测细胞活力；实时荧光定量-聚合酶链式反应检测RIPK1、铁死亡相关蛋白重肽铁蛋白(FTH)1、溶质载体家族7成员(SLC7A)11和GPX4信使RNA(mRNA)表达；Western印迹法检测RIPK1、增殖和侵袭相关蛋白细胞周期素(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9及NRF2/HO-1/GPX4信号通路相关蛋白表达；5-乙炔基-2′-脱氧尿嘧啶核苷检测细胞增殖；Transwell检测细胞侵袭；原位末端转移酶标记技术检测细胞凋亡；酶联免疫吸附试验检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)和总谷胱甘肽(T-GSH)水平；MitoSOX荧光探针检测线粒体活性氧(ROS)荧光强度；亚铁离子(Fe~(2+))检测试剂盒检测Fe~(2+)水平。结果 40、60、80、100、120 nmol/L芬戈莫德处理后，A549细胞活力均显著下降(P<0.05);与BEAS-2B组相比，A549组中RIPK1 mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05);与A549组相比，FTY720组中RIPK1 mRNA和蛋白表达、凋亡率、MDA、ROS、Fe~(2+)水平均明显升高，增殖率和侵袭个数、CyclinD1、MMP-2和MMP-9表达、SOD活性和T-GSH水平、FTH1、SLC7A11和GPX4 mRNA、NRF2、HO-1和GPX4蛋白表达明显降低(P<0.01,P<0.001);与FTY720+si-NC组相比，FTY720+si-RIPK1组增殖率和侵袭个数、CyclinD1、MMP-2和MMP-9表达、SOD活性和T-GSH水平、FTH1、SLC7A11和GPX4 mRNA、NRF2、HO-1和GPX4蛋白表达均明显升高，凋亡率、MDA、ROS、Fe~(2+)水平明显降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论 芬戈莫德能够抑制A549细胞增殖和侵袭、促进其凋亡，促进细胞氧化损伤并诱导铁死亡，可能与调控RIPK1表达抑制NRF2/HO-1/GPX4信号通路的激活有关。
关键词：肺癌;;芬戈莫德;;受体相互作用丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1;;氧化损伤;;铁死亡
基金资助：2023年度山东省中医药科技项目(M-2023124)
