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作者：韦靖;莫圣龙;杨成敏;
单位：广西-东盟经济技术开发区人民医院(南宁市第十人民医院);右江民族医学院附属医院;
摘要：目的 探讨长链非编码(lnc)RNA H19在非创伤性脑出血(ntICH)患者中表达及其靶向微小RNA(miR)-140-5p/高迁移率族蛋白(HMG)A2轴对缺氧/复氧(H/R)所致PC12细胞损伤的影响及机制。方法 实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测ntICH患者和健康志愿者血清中lncRNA H19表达水平，Pearson相关分析ntICH患者血清中lncRNA H19表达水平与血肿体积的相关性。构建H/R所致PC12细胞损伤模型，检测细胞中lncRNA H19表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA H19、miR-140-5p和HMGA2间靶向关系。PC12细胞分为正常(normal)组、H/R组、H/R+si-NC组、H/R+si-H19组、H/R+si-H19+in-NC组、H/R+si-H19+miR-140-5p inhibitor组，qRT-PCR检测细胞中lncRNA H19、miR-140-5p和HMGA2 mRNA表达，Western印迹检测细胞中HMGA2蛋白表达，噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性，流式细胞仪检测细胞凋亡率，检测细胞内乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平，2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法检测细胞内活性氧(ROS)水平，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平。结果 lncRNA H19在ntICH患者血清中明显高表达(P<0.05),且与血肿体积呈正相关(r=0.744,P<0.05)。生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验显示，PC12细胞中miR-140-5p与lncRNA H19、HMGA2存在靶向关系。与normal组比较，H/R组PC12细胞中lncRNA H19、HMGA2 mRNA和蛋白表达、细胞凋亡率、细胞内LDH、MDA、ROS水平及培养上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平明显升高，miR-140-5p表达、细胞存活率、细胞内SOD水平显著降低(P<0.05);沉默lncRNA H19表达可明显降低H/R处理PC12细胞中HMGA2 mRNA和蛋白表达、细胞凋亡率、细胞内LDH、MDA、ROS水平及培养上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平，明显升高miR-140-5p表达、细胞存活率、细胞内SOD水平(P<0.05);抑制miR-140-5p表达可明显升高H/R处理PC12细胞中HMGA2 mRNA和蛋白表达，并明显减弱沉默lncRNA H19对H/R所致PC12细胞损伤的影响(P<0.05)。结论 lncRNA H19在ntICH患者血清中高表达，沉默lncRNA H19可靶向miR-140-5p/HMGA2轴降低H/R处理PC12细胞中氧化应激和炎症反应，减轻H/R所致PC12细胞损伤。
关键词：长链非编码(lnc)RNA H19;;非创伤性脑出血;;微小RNA(miR)-140-5p;;高迁移率族蛋白A2;;缺氧/复氧;;PC12细胞
