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作者：徐林艳;曾怡兰;李慧;吴奇;
单位：中南大学湘雅医学院附属长沙医院(长沙市第一医院)呼吸与危重症医学科;中南大学湘雅医学院附属长沙医院(长沙市第一医院)急诊科;
摘要：目的 探究栀子苷(GEN)上调微小RNA(miR)-145-5p对脂多糖(LPS)诱导的人肺泡上皮细胞(A549)炎症损伤、核转录因子(NF)-κB信号通路关键因子的影响。方法 体外培养人肺泡上皮细胞A549,用细胞计数试剂盒(CCK)-8法测定不同浓度GEN(1、10、100μmol/mL)对LPS诱导的A549细胞活力的影响，选择合适的GEN浓度进行后续实验。将A549细胞分为对照(Con)组(不做干预)、LPS(10μg/ml LPS处理)组、空载质粒(mimics NC)组(转染空载质粒至A549细胞)、miR-145-5p过表达质粒(miR-145-5p mimics)组(转染miR-145-5p mimics至A549细胞)、GEN(LPS基础上加100μmol/ml GEN)组、GEN+mimics NC(转染空载质粒至细胞，转染成功后，加10μg/ml LPS,之后加100μmol/ml GEN)组、GEN+miR-145-5p mimics(转染miR-145-5p mimics至细胞，转染成功后，加10μg/ml LPS,之后加100μmol/ml GEN)组，LPS处理24 h后药物干预24 h。采用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)测定各组细胞中miR-145-5p mRNA表达；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子白细胞介素(IL)-6、IL-8及肿瘤坏死因子(TNF)-α水平；Hoechst33258染色法检测细胞凋亡率；Western印迹法测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3和NF-κB关键蛋白表达。结果 与Con组比较，LPS组细胞活力显著下降(P<0.05);与LPS组相比，100μmol/ml浓度GEN的A549细胞活力显著升高(P<0.05),所以选择100μmol/ml GEN进行后续实验。mimics NC组和Con组miR-145-5p表达无明显差异(P>0.05),miR-145-5p mimics组miR-145-5p表达显著高于mimics NC组(P<0.05),说明miR-145-5p mimics组转染成功。LPS组细胞凋亡率、IL-6、IL-8、TNF-α水平及caspase-3、磷酸化(p)-NF-κB蛋白表达较Con组显著增加(P<0.05);GEN组上述指标较LPS组显著减少(P<0.05);GEN+miR-145-5p mimics组上述指标较GEN+mimics NC组显著降低(P<0.05)。结论 GEN上调miR-145-5p可抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞炎症损伤及凋亡，其作用机制可能与NF-κB信号通路转导有关。
关键词：急性肺损伤;;肺泡上皮细胞;;脂多糖;;栀子苷;;微小核糖核酸-145-5p;;核转录因子-κB信号通路;;炎症因子
基金资助：湖南创新型省份建设专项项目(2023JJ40065);; 湖南省卫生健康委科研计划项目(202202053728);; 长沙市卫生健康委计划项目(KJ-B2023053)
