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作者：李巧玲;胡阳;周慧灵;喻勋;文李;吴昊;
单位：长沙理工大学食品与生物工程学院;
摘要：[目的]改善D-来苏糖异构酶在酸性环境下的活性。[方法]通过对来源于Caldanaerobius polysaccharolyticus菌株的D-来苏糖异构酶进行表面残基的溶剂可及表面生物信息学分析，并设计得到突变位点K2D、K2E、K8D、K8E、K18D和K18E。通过构建突变体，实现其在大肠杆菌中的重组诱导异源表达，利用镍离子亲和层析柱分离纯化得到重组突变体酶，并开展体外重组突变体酶在酸性pH 5.5和近中性pH 6.5下催化转化D-果糖制备D-甘露糖的差异比较试验。[结果]重组突变体酶K8D和K8E显著提升了D-果糖的催化转化率，最优条件（pH 6.5）下的转化率达140%；而在pH 5.5时，转化率较野生酶提高了1.26倍。[结论]通过分子改造手段成功提高了D-来苏糖异构酶突变体在酸性条件下的反应活性。
关键词：D-甘露糖;;D-来苏糖异构酶;;分子改造;;生物酶法;;酸稳定性
基金资助：湖南省自然科学基金青年项目（编号：2023JJ40018）;; 国家自然科学基金青年项目（编号：32201963）;; 湖南省科技创新计划资助（编号：2023RC3137）;; 国家级大学生创新创业训练计划项目（编号：S202310536041）
