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作者：李言初;杨玉莹;胡卫成;刘书成;魏帅;
单位：广东海洋大学食品科技学院;广东省水产品加工与安全重点实验室;广东省海洋生物制品工程实验室;扬州大学基础医学院;大连工业大学海洋食品精深加工关键技术省部共建协同创新中心;
摘要：[目的]获得重组原肌球蛋白（tropomyosin,TM）。[方法]先从National Center of Biotechnology Information(NCBI)数据库获得TM同源蛋白的基因序列，并据此设计特异性引物，再以凡纳滨对虾虾肉cDNA为模板，PCR扩增并测序分析了凡纳滨对虾TM编码基因序列，最后利用大肠杆菌异源重组表达载体pET29a，构建了凡纳滨对虾TM的原核重组表达体系。[结果]RNA样品经琼脂糖凝胶电泳后，条带清晰明亮、泳道无弥散区，cDNA样品在300 bp左右有清晰条带，说明该研究成功提取了结构完整的凡纳滨对虾虾肉总RNA样品并反转录合成了cDNA。PCR结果表明，凡纳滨对虾TM编码基因在900 bp处有单一条带，基因序列Blast比对结果显示克隆的TM编码基因与已知凡纳滨对虾TM编码基因高度同源（99.77%）。该研究进一步构建了TM重组表达载体pET29a-TM,SDS-PAGE结果显示其在表达宿主菌中高效表达了目标蛋白，获得了相对分子质量约为3.7×10~4的可溶性重组TM蛋白条带。[结论]该研究克隆了凡纳滨对虾TM编码基因并构建其原核表达体系，高效地获得了可溶性重组TM蛋白。
关键词：原肌球蛋白;;食物过敏;;凡纳滨对虾;;基因克隆;;重组表达
基金资助：国家自然科学基金面上项目(编号：32272245);; 国家虾蟹产业技术体系(编号：CARS-48)
