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作者：苏琰;李融;
单位：合肥职业技术学院;巢湖学院;
摘要：[目的]构建重组工程菌表达抗菌肽Plectasin，优化重组工程菌的高密度发酵条件，并对优化生产所得重组抗菌肽进行抑菌活性研究。[方法]为提高目的蛋白可溶性表达，依据原核表达系统的密码子偏爱性优化合成plectasin基因，切除信号肽部分，选择pET32a（+）表达载体，构建重组质粒pET32a-plectasin，导入大肠杆菌（Escherichia coli）感受态细胞BL21(DE3)/pLysS。设计单因素试验和正交试验对重组工程菌的20 L高密度发酵参数进行优化。对优化条件后生产获得Plectasin进行纯化鉴定并对其抑菌活性进行分析。[结果]研究成功构建E.coli BL21(DE3)pLysS/pET32aplectasin表达菌株，优化后20 L高密度发酵工艺条件为：诱导温度30℃，接种量2%。发酵时长15 h，纯化后重组蛋白质量浓度为（0.62±0.02） g/L。表达产物对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,ATCC 25923）的最小抑菌质量浓度为32μg/mL。[结论]通过优化原核表达高密度发酵条件提高了重组Plectasin的可溶性表达产量，发酵产物对金黄色葡萄球菌表现出一定的抑菌活性。
关键词：高密度发酵;;可溶性表达;;Plectasin;;分批补料培养;;抑菌活性
基金资助：安徽省教育厅高校自然科学重点研究项目(编号：KJ2021A1386);; 安徽省高校青年骨干人才国内访学研修项目(编号：gxgnfx2021199);; 合肥职业技术学院产学研团队项目(编号：2024CXYTD02);合肥职业技术学院生物医药协同创新平台项目(编号：2024PTKJA01)
