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作者：文宇萍;刘金熙;金清;崔虎山;
单位：延边大学农学院;延边大学附属医院西区医院;
摘要：目的:分析柠檬明串珠菌中D-乳酸脱氢酶(D-LDH)的酶学特性。方法:对柠檬明串珠菌KM20中D-乳酸脱氢酶基因进行克隆表达并构建表达质粒，转化至Escherichia coli BL21(DE3)中实现过表达。结果:经Ni-NTA柱亲和层析纯化后，D-LDH-1与D-LDH-2编码的蛋白分子质量分别为40.0,38.5 kDa;比活力分别为2.18,153.10 U/mg;在丙酮酸还原中两种酶的最适pH值与最适温度均为8.0与40℃;而乳酸氧化时D-LDH-2的最适pH值与最适温度分别为12.0与30℃。D-LDH-1与D-LDH-2对草酰乙酸、苯丙酮酸和2-酮戊二酸具有较强的催化能力，且Ca~(2+)、Cu~(2+)和Na~+对其酶活性均具有促进作用，Zn~(2+)与SDS对酶活性有极高的抑制作用。此外，两种酶对丙酮酸的K_m值分别为2.98,6.11 mmol/L,对丙酮酸的K_(cat)/K_m分别为6.04×10~2,2.28×10~4 L/(mol·s),LDH-2对D-乳酸的K_(cat)/K_m为65.0 L/(mol·s)。结论:D-LDH-1与D-LDH-2为柠檬酸明串珠菌中催化D-乳酸合成的关键酶。
关键词：基因工程;;D-乳酸;;D-乳酸脱氢酶;;柠檬明串珠菌
基金资助：吉林省科技发展计划技术创新引导项目(编号：20220402053GH);; 国家自然科学基金地区科学基金项目(编号：31660452)
