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作者：吴箫;梁赟;钟于红;郭原臻;黄斌辉;何庆华;
单位：南昌大学食品学院;南昌大学食品科学与资源挖掘全国重点实验室;南昌大学中德联合研究院;
摘要：为了提升真菌毒素抗独特型纳米抗体的免疫分析性能，并实现双特异性检测抗原的模拟，本研究以玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）、脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol,DON）的抗独特型纳米抗体N28、Z6为研究对象，将SpyCatcher/SpyTag标签与N28、Z6分别进行融合表达，在此基础上基于体外自组装的方式，开展N28、Z6的双价、双特异性抗独特型纳米抗体的构建研究。结果表明，实现了四种SpyCatcher/SpyTag标签融合抗独特型纳米抗体N28-SpyCatcher、N28-SpyTag、Z6-SpyCatcher、Z6-SpyTag的原核可溶表达。基于Z6-SpyCatcher、Z6-SpyTag所建立的竞争抑制标准曲线的IC_(50)分别为0.18、0.20 ng/mL，其灵敏度高于单体Z6的IC_(50)(0.28 ng/mL);SpyCatcher标签与N28融合后有利于N28检测灵敏度的提升，IC_(50)值由94.39降低至42.33 ng/mL，而SpyTag标签与N28融合后，则抑制了其与DON抗体的结合。此外，在4℃反应12 h的简单反应条件下，基于SpyCatcher/SpyTag的体外自组装特性，成功制备了Z6、N28的双价、双特异性抗独特型纳米抗体Z6-Z6、N28-28与N28-Z6、Z6-N28。ELISA的鉴定结果表明，双价抗独特型纳米抗体均保留了与对应抗体的结合特性，其中N28-Z6还实现了同时与ZEN、DON抗体的结合活性，由于SpyTag标签与N28结合会阻碍其与DON抗体的结合，因此Z6-N28仅保留了与ZEN抗体结合的活性。综上，本研究基于SpyCatcher/SpyTag实现了ZEN/DON双价、双特异性抗独特型纳米抗体的简便快速制备，同时提示SpyCatcher标签对于ZEN/DON抗独特型纳米抗体的免疫分析性能提升具有促进作用。
关键词：抗独特型纳米抗体;;SpyCatcher/SpyTag;;真菌毒素;;玉米赤霉烯酮;;脱氧雪腐镰刀菌烯醇
基金资助：江西省“双千计划”人才项目（JXSQ2023201029）;; 江西省自然科学基金重点项目（20232ACB205027）
