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作者:李恩静;王丹;李赫婧;杨红莲;
单位:北京市食品检验研究院(北京市食品安全监控和风险评估中心),国家市场监管重点实验室(食品安全重大综合保障关键技术);
摘要:鉴于对现有检测方法的补充,应用微滴式数字聚合酶链式反应法(Droplet Ddigital polymerase chain reaction, ddPCR),建立了婴幼儿配方乳粉中乳杆菌的定量检测方法。应用PCR和q PCR方法筛选出1对乳杆菌单拷贝特异基因引物探针,且对ddPCR反应条件进行优化,并与平板计数方法进行对照验证。结果表明,该方法具有良好的特异性,不与10种近缘乳酸菌发生交叉反应;细菌纯培养液的检出限为313 CFU/mL,模拟样品检出限为3170 CFU/g,灵敏度较高;方法的变异系数为3.89%~11.21%,具有良好的重复性;不同浓度菌液与平板计数方法结果偏差小于10%,结果一致性较好。所建立的dd PCR方法定量检测婴幼儿配方乳粉中的乳杆菌,达到了快速、灵敏、准确的目的。
关键词:微滴数字PCR;;定量检测;;乳杆菌;;婴幼儿配方乳粉