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作者：曾静;郭建军;王通;袁林;
单位：江西省科学院微生物研究所;
摘要：本研究旨在通过共表达分子伴侣蛋白以及优化发酵条件来提高III型普鲁兰水解酶（TK-PUL）在短小芽孢杆菌中的分泌表达水平。通过构建共表达TK-PUL和分子伴侣蛋白的多种重组短小芽孢杆菌，并以胞外酶活为指标对其进行筛选，确定最有利于TK-PUL分泌表达的分子伴侣蛋白及对应的重组短小芽孢杆菌。在此基础上采用单因素实验和响应面法优化重组短小芽孢杆菌的发酵条件。结果表明，共表达分子伴侣蛋白PrsABa的重组短小芽孢杆菌的胞外酶活达到98.79 U/mL，提高了0.31倍。该重组短小芽孢杆菌的最佳培养基包括19.65 g/L葡萄糖、21.46 g/L酵母提取物、12.01 g/L MgCl_2·6H_2O、9.02 g/L脯氨酸、0.01 g/L FeSO_4·7H_2O、0.01 g/L MnSO_4·4H_2O、0.001 g/L ZnSO_4·7H_2O。在发酵温度为35℃、起始发酵pH为7.0的条件下，该重组短小芽孢杆菌于最佳培养基中培养66 h时，其胞外酶活达到192.68 U/mL，提高了1.56倍。本研究通过共表达分子伴侣蛋白和发酵优化实现了TK-PUL在短小芽孢杆菌的高效分泌表达，为TK-PUL的应用提供了基础。
关键词：III型普鲁兰水解酶;;短小芽孢杆菌;;胞外分子伴侣蛋白;;发酵优化;;分泌表达
基金资助：国家自然科学基金地区科学基金项目（32160579）;; 江西省主要学科学术和技术带头人培养计划项目（20212BCJ23033,S2021GDQN2403）;; 江西省科学院基础研究项目（2022YJC2006）
